| CD20片段抗体在红花悬浮细胞中的表达研究 |
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| 引用本文： | 王立勇,刘秀明,张 玲,等.CD20片段抗体在红花悬浮细胞中的表达研究[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2017,45(12):112-120. |
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| 作者姓名： | 王立勇 刘秀明 张 玲 等 |
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| 作者单位： | 吉林农业大学 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心，中药材学院,吉林农业大学 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,吉林农业大学 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心，中药材学院 |
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| 基金项目： | “十二五”国家高新技术研究与发展计划项目（2011AA100606）；吉林省科技厅项目（20150623024TC-11）； 国家自然科学基金项目（31101172，31501366） |
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| 摘 要： | 【目的】研究用红花愈伤组织建立红花悬浮细胞培养体系的条件,并利用红花悬浮细胞通过农杆菌介导转化法表达CD20复合片段抗体。【方法】以红花子叶为外植体,研究不同种类激素组合对愈伤诱导率的影响,筛选优质愈伤组织进行悬浮培养,探索不同初始接种量、蔗糖质量分数、水解酪蛋白质量浓度对红花悬浮细胞生长的影响。将CD20复合片段抗体基因两端引入XmaⅠ/EcoRⅠ酶切位点,并将其与pEASY-T1和pBasta载体相连,构建pEASY-T1-CD20克隆载体和pBasta-CD20表达载体,再将构建的pBasta-CD20表达载体转入根瘤农杆菌,利用根瘤农杆菌介导红花悬浮细胞转化法表达CD20复合片段抗体。【结果】红花子叶愈伤诱导最佳条件为MS+NAA 2mg/L+6-BA 0.5mg/L、温度(25±0.1)℃、光照70μmol/(m2·s)连续光照,继代培养条件为MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.5mg/L、30μmol/(m2·s)连续光照、温度(25±0.1)℃。悬浮细胞体系培养最佳条件为不加琼脂粉的MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.5mg/L、接种量2.5g(50mL培养基)、蔗糖质量分数2%、水解酪蛋白800mg/L。pBastaCD20表达载体构建成功,且目的蛋白在红花悬浮细胞中成功表达。【结论】成功构建了红花悬浮细胞培养体系,并用该体系成功表达了CD20复合片段抗体。
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| 关 键 词： | 红花愈伤组织 悬浮细胞 农杆菌介导 表达载体 CD20复合片段抗体 |
| 收稿时间： | 2016/10/24 0:00:00 |
Expression of CD20 antibody fragment in safflower suspension cells |
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| WANG Liyong,LIU Xiuming and ZHANG Ling,et al.Expression of CD20 antibody fragment in safflower suspension cells[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2017,45(12):112-120. |
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| Authors: | WANG Liyong LIU Xiuming and ZHANG Ling |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | safflower callus suspension cells agrobacterium-mediated transformation expression vectors CD20 complex antibody fragment |
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