| 草鱼TGF-β1、Smad4基因的克隆及真核过表达和RNA干扰表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 张好放,郁二蒙,王广军,余德光,李志斐,谢骏.草鱼TGF-β1、Smad4基因的克隆及真核过表达和RNA干扰表达载体的构建[J].中国农业大学学报,2017,22(4):120-128. |
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| 作者姓名： | 张好放 郁二蒙 王广军 余德光 李志斐 谢骏 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院 珠江水产研究所, 广州 510380;上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306;中国水产科学研究院 珠江水产研究所, 广州 510380;中国水产科学研究院 珠江水产研究所, 广州 510380;中国水产科学研究院 珠江水产研究所, 广州 510380;中国水产科学研究院 珠江水产研究所, 广州 510380;中国水产科学研究院 珠江水产研究所, 广州 510380 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（31402312）；国家现代农业产业技术体系建设专项（CARS-46-17） |
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| 摘 要： | 为研究TGF-β1/Smad4信号通路在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉发育过程中的作用机制,首先克隆了草鱼TGF-β1、Smad4基因开放阅读框(ORF,Open reading frame)序列各1 134和1 644bp。其次,在TGF-β1、Smad4序列两端分别加上相应的酶切位点,同时对pcDNA3.1(+)真核表达载体进行双酶切,将带酶切位点的片段正向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建TGF-β1、Smad4基因的真核过表达载体pcDNA3.1(+)-TGF-β1、pcDNA3.1(+)-Smad4。另一方面,根据TGF-β1、Smad4基因序列全长分别设计3对长度为48bp的shRNA,然后将构建好的shRNA插入到载体pRNA-U6.1/Neo中,即可成功构建TGF-β1、Smad4基因的RNA干扰表达载体pRNA-U6.1/Neo-TGF-β1和pRNA-U6.1/Neo-Smad4。
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| 关 键 词： | 草鱼 克隆 真核表达载体 RNA干扰 |
| 收稿时间： | 2016/3/17 0:00:00 |
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