| 西伯利亚百合病毒RNA提取及RT-PCR方法的比较与优化 |
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| 引用本文： | 赵庆芳,韩静,马平霞,丁文龙,李巧峡.西伯利亚百合病毒RNA提取及RT-PCR方法的比较与优化[J].北方园艺,2008(7). |
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| 作者姓名： | 赵庆芳 韩静 马平霞 丁文龙 李巧峡 |
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| 作者单位： | 西北师范大学生命科学学院,甘肃,兰州,730070 |
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| 基金项目： | 甘肃省科技攻关项目，甘肃省兰州市科技局科研项目 |
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| 摘 要： | 在对感染西伯利亚百合的CMV、LSV、LmoV 3种病毒的检测上,对4种常见的RNA提取方法及影响RT-PCR体系的因素进行了比较研究.改良优化了的RNA提取方法,不需用DEPC水处理和高温烘器皿,省去液氮研磨过程,采用该法从百合叶片中提取总RNA,整个过程及后继反应均不需使用RNasin,降低了成本,同时提取的RNA质量高,适于后期RT-PCR的检测,更适合于百合幼嫩叶片和试管苗RNA的提取.运用一步法,建立了CMV、LSV、LMoV 3种病毒的RT-PCR优化体系,最优反应体系为:M-MLV 5×Reaction.Buffer 1 μL、10×PCR buffer0.5 μL、2.5 mM dNTPs(each)0.8 μL、10 pmol/μL下游引物0.2 μL、10 pmol/μL上游引物0.2μL、M-MLVRT 200 U/μL 0.1 μL、2.5 U/μL Taq polymerase 0.1 μL;0.4 μL感病材料RNA提取液,剩余部分用无菌双蒸水补足,使反应体系达到10μL.
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| 关 键 词： | 西伯利亚百合 RNA提取 病毒检测 |
Comparison and Optimization of the Methods on RNA Extraction of Three Viruses and RT-PCR in Siberia Lilium |
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| ZHAO Qing-fang,HAN Jing,MA Ping-xia,DING Wen-long,LI Qiao-xia.Comparison and Optimization of the Methods on RNA Extraction of Three Viruses and RT-PCR in Siberia Lilium[J].Northern Horticulture,2008(7). |
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| Authors: | ZHAO Qing-fang HAN Jing MA Ping-xia DING Wen-long LI Qiao-xia |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RT-PCR |
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