大肠杆菌菌影制备及介导pEGFP-N1在RAW264.7细胞中表达 |
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引用本文: | 焦红梅,贺丽,杨慧,李国才,陈红菊,严华,戴华,季明春.大肠杆菌菌影制备及介导pEGFP-N1在RAW264.7细胞中表达[J].扬州大学学报(农业与生命科学版),2014(3). |
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作者姓名: | 焦红梅 贺丽 杨慧 李国才 陈红菊 严华 戴华 季明春 |
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作者单位: | 扬州大学医学院; |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(31100652) |
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摘 要: | 通过PCR扩增噬菌体PhiX174裂解基因E,并将其插入到温控表达载体pBV220中,构建重组温控表达质粒pBV220-E。将重组质粒pBV220-E转化至大肠杆菌DH5α中,升温到42℃诱导E基因的表达。将真核表达质粒pEGFP-N1与大肠杆菌菌影孵育后转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,荧光显微镜观察pEGFP-N1的表达情况。结果表明:扩增的E基因全长为276bp,与GenBank公布的基因序列一致。电镜观察结果显示,细菌表面出现跨膜孔道,细菌内容物经孔道排出形成空壳。荧光显微镜观察结果显示,大肠杆菌菌影介导的pEGFP-N1在小鼠巨噬细胞中获得表达。为进一步研究以细菌菌影为基础的新型灭活疫苗和载体疫苗提供参考依据。
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关 键 词: | 大肠杆菌菌影 噬菌体PhiX 裂解基因E 温控表达 转染 |
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