| 小反刍兽疫病毒N基因在大肠杆菌中的表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 贾凤芹,李刚,李伟,范晓娟,张坤.小反刍兽疫病毒N基因在大肠杆菌中的表达及鉴定[J].农业生物技术学报,2009,17(2):195-200. |
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| 作者姓名： | 贾凤芹 李刚 李伟 范晓娟 张坤 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京,100193 |
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| 基金项目： | 国家科技支持撑计划，农业部引进国际先进农业科学技术项目 |
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| 摘 要： | 参照GenBank中小反刍兽疫病毒((Peste des petits ruminants virus，PPRV)N基因序列（Nigeria/75/1）(1 578 bp)设计了1对添加EcoRⅠ和Not Ⅰ酶切位点的引物，对从奥地利引进的pCI-neo-PPRN质粒进行PCR扩增，克隆至pGM-T载体，并转化大肠杆菌Escherichia. coli TOP10感受态细胞，获得重组质粒pGM-T-PPRN。将重组质粒经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切的产物插入原核表达载体pET-32a（+），构建原核表达质粒pET-PPRN，将其转化进BL21(DE3)感受态细胞中后用IPTG诱导表达， 收集菌液进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析，结果表明小反刍兽疫病毒N基因在BL21(DE3) 成功表达。所表达融合蛋白的相对分子质量约为80 kD，并能被组氨酸单抗、PPRV标准阳性羊血清及PPRV疫苗免疫羊血清所识别。
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| 关 键 词： | 小反刍兽疫病毒 N基因 原核表达 |
| 收稿时间： | 2008-5-16 |
| 修稿时间： | 2008-6-12 |
Expression and Identification of Peste des petits ruminants virus N Gene in Escherichia coli |
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| JIA Feng-qin,LI Gang,LI Wei,FAN Xiao-juan,ZHANG Kun.Expression and Identification of Peste des petits ruminants virus N Gene in Escherichia coli[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2009,17(2):195-200. |
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| Authors: | JIA Feng-qin LI Gang LI Wei FAN Xiao-juan ZHANG Kun |
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| Abstract: | A pair of primers added EcoRⅠand NotⅠsites was designed and synthesized based on the sequence of the nucleocapsid（N）protein gene of Peste des petits ruminants virus (PPRV), which was for amplifying the full-length N gene fragment of pCI-neo -PPRN plasmid from Austria. The fragment was cloned into pGM-T vector and transformed into Escherichia coli TOP10. Then the cloned fragment was subcloned into prokaryotic expression vector pET-32a(+), and the recombinant expression plasmid pET-PPRN was expressed in E.coli BL21 (DE3) with inducement. The size of the recombinant N fusion protein was 80 kD. The recombinant PPRV N fusion protein could be detected with Histidine monoclonal antibody or goat anti-PPRV sera by Western blot. |
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