| 人参鲨烯环氧酶基因的克隆与原核表达 |
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| 引用本文： | 胡 薇,刘 宁,田玉华.人参鲨烯环氧酶基因的克隆与原核表达[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2012,40(10):207-212. |
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| 作者姓名： | 胡 薇 刘 宁 田玉华 |
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| 作者单位： | 吉林农业大学 生命科学学院;吉林农业大学 生命科学学院;吉林农业大学 生命科学学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（30570185，31070316） |
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| 摘 要： | 【目的】克隆人参皂苷生物合成途径中的鲨烯环氧酶（SQE）基因，并进行原核表达与纯化，初步探讨SQE活性与人参皂苷生成量之间的关系。【方法】以4年生人参根组织须根为材料，提取其总RNA，反转录为cDNA。以合成的cDNA为模板，对SQE基因进行克隆，再将其插入原核表达载体pET-30a中，构建pET-30a-SQE重组质粒，经酶切和测序鉴定后，转入Rosetta大肠杆菌，经0.8 mmol/L IPTG 37 ℃诱导表达4 h后，进行SDS-PAGE电泳检测，采用NiAgarose亲和层析柱纯化目的蛋白，利用液相色谱串联质谱联用技术（LC-MS）检测SQE的活性。【结果】获得了人参SQE基因1 611 bp的全长编码区cDNA。酶切和测序结果表明，原核表达载体pET-30a-SQE构建成功；SDS-PAGE分析显示，在Rosetta大肠杆菌中成功诱导表达了SQE融合蛋白，且纯化后的目的蛋白纯度较高；LC-MS联用检测结果发现，随着SQE用量的增加，达玛烯二醇的生成量递增。【结论】克隆了人参SQE基因，获得了在体外具有生物学活性的SQE蛋白，并证实了其活性与人参皂苷生成量有很大的相关性。
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| 关 键 词： | 人参 鲨烯环氧酶 cDNA克隆 原核表达 |
| 收稿时间： | 3/5/2012 12:00:00 AM |
Cloning,expression of squalene epoxidase from Panax ginseng |
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| HU Weia,LIU Ninga,TIAN Yu-huaa,LI Yu-tinga,ZHANG Lian-xue.Cloning,expression of squalene epoxidase from Panax ginseng[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2012,40(10):207-212. |
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| Authors: | HU Weia LIU Ninga TIAN Yu-huaa LI Yu-tinga ZHANG Lian-xue |
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| Institution: | b(a College of Life Science,b College of Traditional Chinese Medicine,Jilin Agriculture University,Changchun,Jilin 130118,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Panax ginseng squalene epoxidase cDNA cloning prokaryotic expression |
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