| 鸭β-防御素9(AvBD9)单克隆抗体的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 李子瑞,邵昱昊,韩宗玺,刘晓丽,刘胜旺,马得莹.鸭β-防御素9(AvBD9)单克隆抗体的制备及鉴定[J].农业生物技术学报,2010,18(6). |
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| 作者姓名： | 李子瑞 邵昱昊 韩宗玺 刘晓丽 刘胜旺 马得莹 |
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| 摘 要： | 本研究旨在制备抗鸭β-防御素9(AvBD9)蛋白的单克隆抗体.首先用pGEX-6p-1载体表达的鸭AvBD9蛋白做抗原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠(Mus musculus),免疫3次,每次间隔15 d,融合前3 d加强免疫1次.然后将鸭AvBD9基因亚克隆到原核表达载体pET-32a的EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切位点上,构建重组表达质粒pET-32a-duckAvBD9,将重组质粒转化至大肠杆菌(Escheriohia coli)BL21(JM83-)株,经IPTG诱导表达、镍柱纯化后做检测原.用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot相结合的方法进行筛选及鉴定,经3次亚克隆后得到1株单抗,命名为1F11.结果表明:重组pET-32a-duckAvBD9蛋白大小为26kD,与预期大小一致,并能被抗pGEX-duck AvBD9阳性血清识别.单抗1F11在pGEX-6p-1空载体蛋白、pGEX-duck AvBD9蛋白、pGEX-duck AvBD10蛋白、pGEX-chicken AvBD10蛋白中能够特异性识别pGEX-duckAvBD9蛋白.其亚类鉴定重链为IgG1,轻链为κ链.本研究获得了1株鸭AvBD9蛋白的单克隆抗体,单抗1F11的特异性良好,可用于对鸭AvBD9蛋白的生物学功能及活性作进一步研究.
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| 关 键 词： | 鸭 pGEX-duck AvBD9 pET-32a-duck AvBD9 单克隆抗体 |
Preparation and Identification of Monoclonal Antibodies against Duck Avian β-defensin 9 (AvBD9) |
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| Li Zirui,Shao Yuhao,Han Zongxi,Liu Xiaoli,Liu Shengwang,Ma Deying.Preparation and Identification of Monoclonal Antibodies against Duck Avian β-defensin 9 (AvBD9)[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2010,18(6). |
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| Authors: | Li Zirui Shao Yuhao Han Zongxi Liu Xiaoli Liu Shengwang Ma Deying |
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