| 利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒CP互作的寄主因子 |
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| 引用本文： | 何乙坤,钟敏,胡同乐,王树桐,段豪,丁丽,王亚南,曹克强.利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒CP互作的寄主因子[J].中国农业科学,2014,47(24):4821-4829. |
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| 作者姓名： | 何乙坤 钟敏 胡同乐 王树桐 段豪 丁丽 王亚南 曹克强 |
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| 作者单位： | 河北农业大学植物保护学院，河北保定 071001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31201487）、河北省青年拔尖人才计划、国家苹果现代产业技术体系（CARS-28） |
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| 摘 要： | 【目的】利用酵母双杂交系统筛选与苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV）外壳蛋白（coat protein, CP）互作的寄主因子，利用生物信息学方法分析其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。【方法】首先构建ACLSV CP的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CP，转化至酵母菌株Y2H gold中，测定转化菌在SD/-Trp、SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade-X-α-Gal平板上的生长情况，从而判断其在酵母双杂交过程中对报告基因的自激活活性。将pGBKT7-CP及pGBKT7分别转化至酵母菌株Y2H gold，培养不同时间后，用紫外分光光度计测定OD600值，分析pGBKT7-CP对酵母菌生长的影响；然后通过顺序转化的方法自前期已构建好的苏俄苹果（Malus sylvestris cv. R12740-7A）cDNA文库中钓取与ACLSV CP互作的因子，最终在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal平板上筛选生长良好的蓝色阳性菌落，测定序列，并在GenBank中对其进行BLAST分析，根据基因注释推断其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。【结果】成功构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CP，转化至酵母菌株Y2H gold后，转化菌只能在SD/-Trp平板上正常生长，不能在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade-X-α-Gal平板上生长，表明重组质粒自身不能激活报告基因His及Ade的表达，没有自激活活性。酵母双杂诱饵载体pGBKT7-CP与对照空质粒转化菌生长情况相似，证明诱饵载体对酵母菌没有毒性；筛选到了69个互作寄主基因，包括转录因子活性、碳固定活性、细胞内铁离子平衡、防御反应、水解酶活性、氧化酶活性、氧化还原酶活性、光系统II组件、绑定蛋白等10类蛋白，经生物信息学分析，其中8个寄主基因（Malus3-1、Malus4-2、Malus4q1、Malus31-3、Malus49q2、Malus15-1、Malus6-2、Malus91-4）可能在病毒与寄主互作过程中起重要作用。【结论】分析筛选到的重要寄主蛋白功能，推测ACLSV CP与BZIP类、MYB类转录因子、病程相关蛋白（PR-5、PR-8、PR-10）互作，可能调控了寄主对病毒的抗性作用；与光系统II（PSII）的稳定性/装配因子蛋白、铁结合蛋白互作，影响植物光系统的稳定性及叶绿素的形成，从而降低光合作用。这将为揭示ACLSV导致寄主产生褪绿叶斑及树体衰退的原因提供理论依据。
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| 关 键 词： | 苹果褪绿叶斑病毒 苏俄苹果 酵母双杂交 互作基因 |
| 收稿时间： | 2014-06-24 |
Screening of the Host Factors Interacting with CP of Apple chlorotic leaf spot virus by Yeast Two-Hybrid System |
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| HE Yi-kun,ZHONG Min,HU Tong-le,WANG Shu-tong,DUAN Hao,DING Li,WANG Ya-nan,CAO Ke-qiang.Screening of the Host Factors Interacting with CP of Apple chlorotic leaf spot virus by Yeast Two-Hybrid System[J].Scientia Agricultura Sinica,2014,47(24):4821-4829. |
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| Authors: | HE Yi-kun ZHONG Min HU Tong-le WANG Shu-tong DUAN Hao DING Li WANG Ya-nan CAO Ke-qiang |
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| Institution: | College of Plant Protection, Agricultural University of Hebei, Baoding 071001, Hebei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Apple chlorotic leaf spot virus Malus sylvestris cv R12740-7A yeast two-hybrid system interaction gene |
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