| 以番鸭呼肠孤病毒σC表达蛋白为抗原的ELISA方法的建立 |
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| 引用本文： | 张云,耿宏伟,郭东春,胡奇林,刘明.以番鸭呼肠孤病毒σC表达蛋白为抗原的ELISA方法的建立[J].水禽世界,2008(1):34-39. |
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| 作者姓名： | 张云 耿宏伟 郭东春 胡奇林 刘明 |
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| 作者单位： | [1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001 [2]福建农科院牧医所,福建福州350003 |
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| 摘 要： | 将鸭呼肠孤病毒小外壳σC蛋白编码基因克隆于原核表达载体pET32a上，经EcoRⅠ和SacⅠ双酶切鉴定及序列分析，得到重组质粒pET32a-σC，转化DH5α大肠杆菌感受态细胞，经SDS-PAGE和westem-blotting分析，融合蛋白能够与番鸭呼肠孤病毒感染康复鸭血清发生特异反应；以0.15m mol/LIPTG诱导，5h后融合蛋白δC表达量可达高峰，分子量为50ku;融合蛋白纯化后作为包被抗原，建立了检测鸭血清中的呼肠孤病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法，最佳包被浓度为51μg/ml；标准阳性血清的最适稀释倍数为1：40；用该方法对50份鸭血清样品进行检测，并与琼扩抗体检测法相比较，证明该ELISA方法具有良好的特异性和敏感性，该研究为今后鸭呼肠孤病毒的诊断试剂盒的研制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 番鸭呼肠孤病毒 σC编码基因 原核表达 酶联免疫吸附试验 |
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