| A型禽流感病毒通用型核酸检测标准样品的研制及不确定度分析 |
| |
| 引用本文： | 孙涛,;雷质文,;邓明俊,;王群,;郑小龙,;梁成珠,;曹丙蕾,;凌宗帅.A型禽流感病毒通用型核酸检测标准样品的研制及不确定度分析[J].兽医大学学报,2014(9):1471-1475. |
| |
| 作者姓名： | 孙涛 ;雷质文 ;邓明俊 ;王群 ;郑小龙 ;梁成珠 ;曹丙蕾 ;凌宗帅 |
| |
| 作者单位： | [1]山东出入境检验检疫局,山东青岛266002; [2]济南出入境检验检疫局,山东济南250014 |
| |
| 基金项目： | 国家质检总局科研基金资助项目（2011IK010） |
| |
| 摘 要： | 利用基因克隆和体外转录技术,制备A型禽流感病毒通用核酸检测阳性标准样品。根据禽流感基质蛋白基因M的序列,设计全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物。采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线和协作标定的方式,计算标准物质含量（拷贝）,并进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定性试验表明室温20~25℃（相对湿度20%~50%）14d,2~8℃3个月以及-20℃保存1年的含量均无明显变化。核酸标准物质定值为（3.120±0.345）×10^8拷贝数,可用作禽流感病毒通用核酸检测的标准质控品。
|
| 关 键 词： | 计量学 禽流感病毒 荧光定量RT-PCR 标准样品 |
Development and uncertainty analysis of the avian influenza virus reference material which used for nucleic acid amplification testing |
| |
| Institution: | SUN Tao , LEI Zhi-wen ,DENG Ming-jun ,WANG Qun ,ZHENG Xiao-long ,LIANG Cheng-zhu , CAO Bing-lei , LING Zong-shuai (1. Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Qingdao, Shandong 266002, China ; 2. J inan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, J inan 250014, China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | metrology avian influenza virus real-time RT-PCR reference materials |
| 本文献已被 维普 等数据库收录！ |
|
