| 月季花瓣中农杆菌介导的基因瞬时表达体系的优化及其在RNAi中的应用 |
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| 引用本文： | 王磊,陈雯,刘娅,杨若韵,阴霞,马男,高俊平.月季花瓣中农杆菌介导的基因瞬时表达体系的优化及其在RNAi中的应用[J].农业生物技术学报,2014(2):133-140. |
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| 作者姓名： | 王磊 陈雯 刘娅 杨若韵 阴霞 马男 高俊平 |
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| 作者单位： | 中国农业大学观赏园艺与园林系; |
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| 基金项目： | 农业部948重点项目(No.2011-G17) |
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| 摘 要： | 在植物中通过农杆菌介导的基因瞬时表达和基于RNAi的基因沉默可便捷高效地研究基因功能。本研究采用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)注射侵染法,利用GUS作为报告基因,探讨了月季(Rosa hybrida)品种、农杆菌菌株、开花级别、花瓣位置、农杆菌侵染浓度和侵染液成分等因素对月季花瓣中基因瞬时表达效果的影响。结果表明,月季品种蜜糖3级切花的中层花瓣中瞬时表达效果最佳;农杆菌菌株GV3101介导的瞬时表达效果最好,侵染浓度以OD600=0.9为宜,添加10 mmol/L MgCl2及10 mmol/L MES的侵染液效果优于重蒸水。同时,利用上述优化瞬时表达体系进行RNAi沉默,成功抑制了外源报告基因GUS和内源基因RhSAG的表达。相比对照,RhSAG沉默花瓣的萎蔫速度较慢,说明衰老进程得到延缓。该体系的优化为月季花瓣中基因功能的鉴定提供了有效工具。
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| 关 键 词： | 月季 花瓣 农杆菌 瞬时表达 RNAi |
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