| 小鼠Rig-Ⅰ蛋白的原核表达、纯化及其抗体制备 |
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| 引用本文： | 陈 磊,李咸洋,奚绪光.小鼠Rig-Ⅰ蛋白的原核表达、纯化及其抗体制备[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2009,37(8):6-12. |
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| 作者姓名： | 陈 磊 李咸洋 奚绪光 |
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| 作者单位： | 陈磊(西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌,712100;上海交通大学,医学院附属瑞金医院,上海血液学研究所,上海,200025);李咸洋(上海交通大学,医学院附属瑞金医院,上海血液学研究所,上海,200025);奚绪光(西北农林科技大学,生命科学学院,陕西,杨凌,712100) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目 |
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| 摘 要： | 【目的】进一步研究小鼠维甲酸诱导基因Ⅰ(Rig-Ⅰ)蛋白的细胞信号传导、结构与功能。【方法】利用已经构建好的逆转录病毒载体MigRI-Rig-Ⅰ,用PCR方法扩增出小鼠Rig-Ⅰ基因氨基端100 bp长度的片断(Rig-Ⅰ-N),将此片段定向克隆到原核表达载体pGEX-4T2中,构建pGEX-4T2-Rig-Ⅰ-N,再将Rig-Ⅰ基因剩余部分克隆到已构建有Rig-Ⅰ-N部分片段的pGEX-4T2-Rig-Ⅰ-N中,构建融合表达载体pGEX-4T2-Rig-Ⅰ,将其转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,对表达产物GST-Rig-Ⅰ融合蛋白进行纯化,制备抗体,并对抗体效价进行ELISA检测及抗体特异性的Western blot分析。【结果】重组蛋白GST-Rig-Ⅰ能在大肠杆菌中表达,表达的融合蛋白GST-Rig-Ⅰ纯化和洗脱后分子质量为130 ku,纯度>90%,制备的抗体效价达到1∶625 000,并且能够识别在原核表达系统以及真核细胞内表达的小鼠Rig-Ⅰ蛋白。【结论】建立的表达系统能够表达重组蛋白GST-Rig-Ⅰ,制备的抗体具有良好的免疫特异性。
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| 关 键 词： | 小鼠 维甲酸诱导基因Ⅰ(Rig-Ⅰ) 原核表达 抗体制备 |
| 收稿时间： | 2009/2/27 0:00:00 |
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