| 传染性法氏囊病病毒VP2单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制 |
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| 引用本文： | 刘静静,王永山,欧阳伟,等.传染性法氏囊病病毒VP2单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制[J].中国兽医学报,2014(4):530-535. |
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| 作者姓名： | 刘静静 王永山 欧阳伟 等 |
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| 作者单位： | ;1.山东农业大学动物科技学院;2.江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心 |
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| 摘 要： | 为研制传染性法氏囊病病毒(IBDV)快速检测试剂盒,用重组IBDV-VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞触合,获得3株稳定分泌抗VP2蛋白单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为1D11、2G8和2E5,抗体亚类分别为IgG1κ、IgG2bκ和IgG1κ。间接免疫荧光试验(IFA)证明,3株单抗均与VP2发生特异性反应。相加ELISA证明3株mAb识别VP2不同的抗原表位。在病毒中和试验中,1D11和2G8腹水对IBDV的中和效价分别为104和103,而2E5无中和活性。用亲和层析方法纯化1D11和2E5,分别作为包被抗体和标记抗体,建立了IBDV夹心ELISA检测方法,优化了试验条件,测定了其主要性能指标,对IBDV的最低检出量为102 TCID50/mL。用夹心ELISA、AGP和RT-PCR 3种方法同步检测8种试验样品,夹心ELISA与RT-PCR的检测结果一致,显著高于AGP方法。组装成的试剂盒,置于37℃保存7d、4℃保存6个月和-20℃保存24个月,其检测结果没有显著差异(P>0.05)。
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| 关 键 词： | 传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP2 单克隆抗体(mAb) 夹心ELISA |
Development of a sandwich ELISA based on the monoclonal antibodies against VP2 of infectious bursal disease virus |
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