| TGEV S基因原核表达及表达蛋白间接ELISA方法的建立与初步应用 |
| |
| 引用本文： | 鲁娜,宋阳,刘莹,胡桂学.TGEV S基因原核表达及表达蛋白间接ELISA方法的建立与初步应用[J].黑龙江畜牧兽医,2013(1):39-43. |
| |
| 作者姓名： | 鲁娜 宋阳 刘莹 胡桂学 |
| |
| 作者单位： | 白城师范学院生物系;吉林农业大学动物科技学院 |
| |
| 基金项目： | 吉林省重大科技攻关项目(09ZDGG008);白城师范学院校级基金项目([2009]21号) |
| |
| 摘 要： | 为了建立检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),试验参照GenBank公布的TGEV TH-98株S基因序列,设计合成1对引物,RT-PCR扩增相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pET-32a中,以大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞为表达菌株进行诱导表达。再以纯化重组蛋白作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等参数建立检测TGEV S蛋白抗体的间接ELISA方法。结果表明:试验成功克隆了TGEV S基因,扩增片段长度为4 003 bp;构建了重组表达质粒pET-S,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中获得高效表达,表达蛋白分子质量约为148 ku;经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blot分析显示,重组蛋白具有良好的抗原性;以纯化的S重组蛋白作为包被抗原,建立了TGEV S蛋白抗体检测间接ELISA方法;该ELISA方法的抗原最佳包被浓度为18.85μg/mL,最适血清稀释比例为1∶40。
|
| 关 键 词： | 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) S蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验(ELISA) 应用 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
