| 土壤可培养真菌RAPD扩增条件的优化 |
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| 引用本文： | 李钧敏,金则新.土壤可培养真菌RAPD扩增条件的优化[J].土壤通报,2004,35(3):295-298. |
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| 作者姓名： | 李钧敏 金则新 |
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| 作者单位： | 台州学院,生物系,浙江,临海,317000 |
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| 基金项目： | 台州学院校立项目资助(2001-14) |
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| 摘 要： | 以改进的CTAB-溶菌酶-蛋白酶K裂解法抽提土壤可培养真菌总DNA,直接进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析。分别测试了镁离子浓度,4×dNTP浓度,模板DNA量,引物用量,Taq酶用量和牛血清白蛋白浓度对反应结果的影响,通过各因子的组合研究,确定了土壤可培养真菌遗传多样性分析的稳定的RAPD反应体系:15μlPCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10mmolL-1Tris·HClpH9.0,50mmolL-1KCl,0.1%TritonX-100),1.5mmolL-1MgCl2,2UTaq酶(上海华美公司),20ng模板DNA,15pmol引物(上海Sangon公司);dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.2mmolL-1;1mgmL-1牛血清白蛋白。
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| 关 键 词： | 土壤真菌 RAPD 成分 |
| 文章编号： | 0564-3945(2004)03-0295-04 |
| 修稿时间： | 2003年2月5日 |
Optimal Condition for RAPD Experiment of Soil Fungal |
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| LI Jun-min,JIN Ze-xin.Optimal Condition for RAPD Experiment of Soil Fungal[J].Chinese Journal of Soil Science,2004,35(3):295-298. |
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| Authors: | LI Jun-min JIN Ze-xin |
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| Abstract: | The total soil cultured fungal DNA was extracted by the improved CTAB-lysosome-protease K method and was analyzed by random amplified polymorphic DNA markers. The effect of concentration of Mg~(2+), Dntp, DNA templates, primer, Taq polymerase and bovine serum albumin on experimental results were tested and the optimal reaction system of RAPD for soil cultured fungi was determined as follows: 1×Taq polymerase corresponding buffer (10mmol L~(-1) Tris·HCl pH9.0,50mmol L~(-1) KCl, 0.1%Triton X-100), 1.5mmol L~(-1) MgCl_2, 1.5U Taq DNA polymerase, 20ng template DNA, 20pmol primer, 0.2mmol L~(-1) dATP, dCTP, dGTP, dTTP for each in total 15μl reaction volume. |
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| Keywords: | Soil fungal RAPD Composition |
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