| 鸡肝原代细胞药物代谢模型的建立与优化 |
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| 引用本文： | 刘丽,季辉,彭麟,阮祥春,吉利伟,江善祥.鸡肝原代细胞药物代谢模型的建立与优化[J].南京农业大学学报,2015,38(1):127-133. |
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| 作者姓名： | 刘丽 季辉 彭麟 阮祥春 吉利伟 江善祥 |
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| 作者单位： | 南京农业大学动物医学院 |
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| 摘 要： | 目的]建立成年鸡原代肝细胞的药物代谢模型并对其进行优化。方法]以改进的二步灌流法分离8~12周龄的雄性黄羽鸡肝细胞,比较在不同细胞基础培养液条件下鸡肝细胞体外培养的情况,利用倒置显微镜观察肝细胞的形态,利用MTT检测法绘制生长曲线,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,用q PCR和Western blot测定肝细胞中CYP450酶亚型CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和3种酶蛋白的表达量。结果]离体灌流操作简便,获得的细胞存活率高达90%以上;用含0.5 mg·L-1牛胰岛素、10 g·L-1双抗(100 U·m L-1青霉素和链霉素)和体积分数为10%胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝细胞,贴壁培养时可见到肝细胞较为明显的分化过程,贴壁后呈上皮细胞样生长,多角形,胞浆内容物均匀丰富,细胞核清晰透亮,少数有双核,细胞生长状态良好。生长曲线和LDH活性测定结果显示:培养3~5 d时细胞状态稳定,并且在肝原代细胞培养的8 d内,CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和蛋白的表达量没有显著差异。结论]以改进的二步灌流法分离鸡肝细胞操作简便,分离的鸡肝原代细胞存活率高,用含0.5 mg·L-1胰岛素、100 U·m L-1青霉素、100μg·m L-1链霉素和10%胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝原代细胞效果最好,培养3~5 d是进行体外药物代谢等试验的最佳时机。
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| 关 键 词： | 成年鸡 离体灌流 鸡肝细胞 药物代谢模型 优化 |
The establishment and optimization of the drug metabolic model of adult chicken primary hepatocytes |
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| LIU Li;JI Hui;PENG Lin;RUAN Xiangchun;JI Liwei;JIANG Shanxiang.The establishment and optimization of the drug metabolic model of adult chicken primary hepatocytes[J].Journal of Nanjing Agricultural University,2015,38(1):127-133. |
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| Authors: | LIU Li;JI Hui;PENG Lin;RUAN Xiangchun;JI Liwei;JIANG Shanxiang |
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| Institution: | LIU Li;JI Hui;PENG Lin;RUAN Xiangchun;JI Liwei;JIANG Shanxiang;College of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | adult chicken in vitro perfusion chicken hepatocytes drug metabolic model optimization |
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