| 山羊血管紧张素转换酶2基因的克隆表达与生物信息学分析 |
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| 引用本文： | 杨维维,许媛媛,荣超,权素玉,张源淑.山羊血管紧张素转换酶2基因的克隆表达与生物信息学分析[J].南京农业大学学报,2015,38(1):120-126. |
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| 作者姓名： | 杨维维 许媛媛 荣超 权素玉 张源淑 |
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| 作者单位： | 南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30871838) |
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| 摘 要： | 目的]血管紧张素转换酶2(ACE2)是RAS系统的关键调控酶,在动物上的研究较少,本试验研究了山羊ACE2的相关理化性质和功能。方法]利用同源克隆及RT-PCR技术,根据牛的ACE2基因mRNA序列设计引物,从山羊肾脏组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片段,TA克隆到p MD19-T载体并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对生长出的单菌落进行验证后测序分析。根据测序分析结果设计引物,经PCR扩增和酶切连接,构建原核表达载体p ET-28a-ACE2,经过验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导表达ACE2蛋白。结果]山羊ACE2基因c DNA编码区共包括2 415个核苷酸,编码804个氨基酸残基。同源性比对发现,山羊ACE2基因核苷酸序列同源性与绵羊ACE2最高,为99%,与斑马鱼最低,仅为60%。遗传进化分析也表明该ACE2基因与绵羊的遗传距离最近,与斑马鱼处在两个不同的分支上。蛋白结构及理化性质分析预测该山羊ACE2蛋白属于稳定型蛋白,蛋白信号肽序列位于第1氨基酸(aa)~18氨基酸(aa)之间,蛋白跨膜螺旋预测为Ⅰ型跨膜蛋白。成功构建山羊ACE2蛋白胞外部分(19~738 aa)表达载体,表达出的蛋白相对分子质量约为90×103,主要以包涵体的形式在BL21(DE3)中表达。结论]本试验首次成功克隆了山羊ACE2基因编码区(基因序列号:KF921008.1),并对其蛋白结构及理化性质进行了初步预测,同时在大肠杆菌中高效表达了其胞外区蛋白。
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| 关 键 词： | 山羊 血管紧张素转换酶2 基因克隆 生物信息学 表达 |
Clone expression and bioinformatic analysis of angiotensin converting enzyme 2(ACE2) gene from Capra hircus |
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| YANG Weiwei;XU Yuanyuan;RONG Chao;QUAN Suyu;ZHANG Yuanshu.Clone expression and bioinformatic analysis of angiotensin converting enzyme 2(ACE2) gene from Capra hircus[J].Journal of Nanjing Agricultural University,2015,38(1):120-126. |
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| Authors: | YANG Weiwei;XU Yuanyuan;RONG Chao;QUAN Suyu;ZHANG Yuanshu |
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| Institution: | YANG Weiwei;XU Yuanyuan;RONG Chao;QUAN Suyu;ZHANG Yuanshu;Key Laboratory of Animal Physiology and Biochemistry,Ministry of Agriculture,Nanjing Agricultural University; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | goat angiotensin converting enzyme 2(ACE2) gene clone bioinformatics expression |
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