| 基于Spyligase技术的禽流感血凝素H5HA10多聚体抗原的高效制备 |
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| 引用本文： | 贾宾,陈慧心,韩莹倩,郭玉堃,邵科宇,郭豫杰.基于Spyligase技术的禽流感血凝素H5HA10多聚体抗原的高效制备[J].江西农业学报,2019(3). |
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| 作者姓名： | 贾宾 陈慧心 韩莹倩 郭玉堃 邵科宇 郭豫杰 |
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| 作者单位： | 河南农业大学牧医工程学院/农业部动物生化与营养重点实验室 |
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| 摘 要： | 利用Spyligase技术在H5HA10序列的C端和N端分别加上SpyTag和KTag序列,并分别与His6-ArsC、His6-PAS200、His6-XTEN、His6-PEAT、SiTag3-SUMO、SiTag3-MBP、SiTag3-PAS200、SiTag3-XTEN和SiTag3-ArsC促溶标签相连,成功构建了含9种不同促溶性标签的H5HA10重组表达载体,同时构建了1种含有Cherry标签的Spyligase重组表达载体。将这10种重组载体分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,筛选出可以显著促进H5HA10重组蛋白表达的融合标签ArsC。通过优化诱导表达条件,在大量诱导表达、纯化后成功获得了高纯度的H5HA10和Spyligase重组蛋白,最终在PCT缓冲体系中, Spyligase促使H5HA10重组蛋白的蛋白聚合,形成了环化单体、三聚体、六聚体以及九聚体。
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| 关 键 词： | Spyligase技术 流感血凝素H5HA10 原核表达 融合标签 多聚体 |
High-efficient Preparation of Haemagglutinin H5HA10 Polymer Antigen of Avian Influenza Based on Spyligase Technology |
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