| 龙眼体胚发生早期miR166初级体的克隆与表达分析 |
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| 引用本文： | 张清林,苏立遥,厉雪,张舒婷,徐小萍,陈晓慧,王培育,李蓉,张梓浩,陈裕坤,赖钟雄,林玉玲.龙眼体胚发生早期miR166初级体的克隆与表达分析[J].园艺学报,2018,45(8):1501-1506. |
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| 作者姓名： | 张清林 苏立遥 厉雪 张舒婷 徐小萍 陈晓慧 王培育 李蓉 张梓浩 陈裕坤 赖钟雄 林玉玲 |
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| 作者单位： | 福建农林大学园艺植物生物工程研究所，福州 350002 |
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| 基金项目： | 福建省自然科学基金杰出青年项目（2015J06004）；国家自然科学基金项目（31672127，31572088）；福建农林大学科技创新专项基金项目（CXZX2017187） |
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| 摘 要： | 为了解龙眼miR166初级体基因Pri-miR166 S53结构特点及其前体和成熟体在龙眼体胚发生早期的表达模式,采用SMART~(TM) RACE试剂盒和PCR扩增技术克隆龙眼体胚早期miR166基因的初级体(Pri-miR166 S53),确认其转录起始位点,并预测其含有的潜在ORF;利用龙眼基因组数据库提取其启动子序列,预测其含有的顺式作用元件;用实时荧光定量PCR对龙眼体胚发生早期及不同激素处理下的胚性愈伤组织中miR166基因的前体(Pre-miR166 S53)和成熟体(miR166a.2)表达模式进行分析。结果表明:获得长317 bp的Pri-miR166 S53基因初级体序列,对其进行翻译,得到一条长13个氨基酸序列的miPEP(MLCFVDALFLIST)。利用生物信息学软件分析Pri-miR166 S53基因的启动子序列发现,除了具有TATA/CAAT-box外,还含有生长素、脱落酸、乙烯、水杨酸、茉莉酸甲酯及spl、HSE等特异作用元件。实时荧光定量PCR分析表明,在2,4-D调控的龙眼体胚发生早期过程中,从胚性松散型愈伤组织发育到球形胚的过程中,Pri-miR166 S53基因的前体pre-miR166 S53和成熟体miR166a.2都表现为下调趋势;而在无2,4-D调控的龙眼体胚发生早期中,pre-miR166 S53和miR166a.2表达模式不同。此外,pre-miR166S53随ABA和乙烯处理浓度升高呈下调表达,而对不同浓度2,4-D处理无应答;miR166a.2随2,4-D、ABA处理浓度升高呈下调表达,而在乙烯处理下呈上调表达。上述研究结果提示miR166前体和成熟体在对外源激素应答的模式上并不呈简单线性相关,可能存在多层次、多方位的调控。
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| 关 键 词： | 龙眼 miR166初级体 启动子 实时荧光定量PCR 表达特性 |
Cloning and Expression Analysis of miR166 Primary Gene during the Early Stage of Somatic Embryogenesis of Longan |
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| ZHANG Qinglin,SU Liyao,LI Xue,ZHANG Shuting,XU Xiaoping,CHEN Xiaohui,WANG Peiyu,LI Rong,ZHANG Zihao,CHEN Yukun,LAI Zhongxiong,LIN Yuling.Cloning and Expression Analysis of miR166 Primary Gene during the Early Stage of Somatic Embryogenesis of Longan[J].Acta Horticulturae Sinica,2018,45(8):1501-1506. |
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| Authors: | ZHANG Qinglin SU Liyao LI Xue ZHANG Shuting XU Xiaoping CHEN Xiaohui WANG Peiyu LI Rong ZHANG Zihao CHEN Yukun LAI Zhongxiong LIN Yuling |
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| Institution: | 1. Department of Cardiology, The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Heart Center of Xinxiang Medical University, Weihui 453100, China;
2. Emergency Department, The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Weihui 453100, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Dimocarpus longan miR166 primary promoter real-time fluorescence quantitative PCR expression characteristic |
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