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澳洲坚果光壳种MiSAD的克隆与表达
引用本文:杨倩,杨子平,邹明宏,宋喜梅,万继锋,陈菁,罗炼芳,曾辉.澳洲坚果光壳种MiSAD的克隆与表达[J].热带作物学报,2023(2):254-263.
作者姓名:杨倩  杨子平  邹明宏  宋喜梅  万继锋  陈菁  罗炼芳  曾辉
作者单位:1. 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所;2. 农业农村部热带果树生物学重点实验室;3. 海南省热带作物营养重点实验室
基金项目:海南省自然科学基金项目(No.321QN300);;广东省自然科学基金项目(No.2021A151501242);;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(No.1630062022002);
摘    要:澳洲坚果果仁中含有丰富的不饱和脂肪酸(unsaturated fatty acid, UFA),其不饱和脂肪酸生物合成的分子机制还有待进一步解析。植物硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶(SAD)是脂肪酸生物合成途径中形成不饱和脂肪酸的关键酶。本研究以澳洲坚果(Macadamia integrifolia)光壳种为对象,通过PCR技术克隆获得澳洲坚果硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶基因(MiSAD),并对结构功能和表达模式进行了初步分析。结果显示,克隆获得5923 bp的MiSAD基因组DNA序列,该基因由3个外显子2个内含子组成,包含1191 bp的编码框,与公布的粗壳种MtSAD序列高度一致;编码396个氨基酸;MiSAD分子量为45.22 kDa,等电点为5.93,属于酰基-ACP脱饱和酶,是位于叶绿体或质体基质中的水溶性酶;高度保守的区域存在形成酶活位点的2个E-X-X-H二铁原子中心基序,N端和C端氨基酸序列差异较大;二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲为主;三级结构预测中存在形成脂酰链结合部位的螺旋-转角-螺旋(HTH);与蒂罗花的同源性最高达94.2%,与其他物种的SAD同源性也都在80...

关 键 词:澳洲坚果  硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶  基因克隆  表达分析
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