| 毛白杨PtPCP—like基因的克隆及其遗传转化初报 |
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| 引用本文： | 郭斌,刘军梅,李英,陈仲,李昊,叶梅霞,王佳,安新民.毛白杨PtPCP—like基因的克隆及其遗传转化初报[J].北京林业大学学报,2012,34(5):31-36. |
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| 作者姓名： | 郭斌 刘军梅 李英 陈仲 李昊 叶梅霞 王佳 安新民 |
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| 作者单位： | 北京林业大学林木育种国家工程实验室 林木花卉遗传育种教育部重点实验室 国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室;北京林业大学林木育种国家工程实验室 林木花卉遗传育种教育部重点实验室 国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室;北京林业大学林木育种国家工程实验室 林木花卉遗传育种教育部重点实验室 国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室;北京林业大学林木育种国家工程实验室 林木花卉遗传育种教育部重点实验室 国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室;北京林业大学林木育种国家工程实验室 林木花卉遗传育种教育部重点实验室 国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室;北京林业大学林木育种国家工程实验室 林木花卉遗传育种教育部重点实验室 国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室;北京林业大学林木育种国家工程实验室 林木花卉遗传育种教育部重点实验室 国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室;北京林业大学林木育种国家工程实验室 林木花卉遗传育种教育部重点实验室 国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31170631);“973”国家重点基础研究发展计划项目(2012CB114505);“863”国家高技术研究发展计划项目(2011AA100201) |
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| 摘 要： | 利用滤纸吸附噬菌体 PCR法，从毛白杨花芽cDNA文库中分离克隆了PtPCP-like基因cDNA全长序列，测序表明克隆得到的该序列全长595 bp，包含一个完整的开放阅读框，编码91个氨基酸；经BLAST分析发现，该基因包含与拟南芥花粉外被蛋白基因相似的序列，命名为PtPCP-like。采用RT PCR技术检测PtPCP-like基因在各个组织部位的表达模式，结果显示在毛白杨的根和雄花芽中表达丰度最高，而在雌花芽部位表达丰度最低。并且构建35S∶∶PtPCP-like植物表达载体，采用农杆菌介导法将PtPCP-like基因导入烟草中，获得了一批阳性转化植株。采用qRT-PCR技术检测PtPCP-like基因在各个转基因烟草中的表达模式，结果显示在转基因烟草中各个株系均比野生型表达量高，且不同株系间相对表达量差异显著。
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| 关 键 词： | 毛白杨 烟草 qRT-PCR PtPCP—like |
| 收稿时间： | 1900-01-01 |
Cloning and genetic transformation of PtPCP-like from Populus tomentosa |
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| GUO Bin,LIU Jun-mei,LI Ying,CHEN Zhong,LI Hao,YE Mei-xia,WANG Jia,AN Xin-min..Cloning and genetic transformation of PtPCP-like from Populus tomentosa[J].Journal of Beijing Forestry University,2012,34(5):31-36. |
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| Authors: | GUO Bin LIU Jun-mei LI Ying CHEN Zhong LI Hao YE Mei-xia WANG Jia AN Xin-min |
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| Institution: | National Engineering Laboratory for Tree Breeding, Key Laboratory of Genetics and Breeding in Forest Trees and Ornamental Plants of Ministry of Education, Tree and Ornamental Plant Breeding and Biotechnology Laboratory of State Forestry Administration, Beijing Forestry University, 100083, P.R.China. |
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| Abstract: | To understand the genetic and molecular mechanisms of floral development in Populus tomentosa,a full-length cDNA sequence of PtPCP-like gene was isolated from a male floral bud cDNA library of P. tomentosa,with the method of bacteriophage absorption by filter paper-PCR. The sequencing results indicated that the 595 bp sequence contained a complete open reading frame,which encoded 91 amino acid residuals. BLAST analysis revealed that the gene had a similar sequence domain with Arabidopsis pollen coat protein genes,therefore it was named as PtPCP-like. RT-PCR showed that PtPCP-like had higher expression abundance in male poplar floral buds and roots,and a lower abundance in female floral buds. A plant expression vector carrying 35S∶ ∶ PtPCP-like was constructed and transformed into tobacco and poplar via Agrobacterium mediated method,a batch of positive transformation plants were obtained. Expression pattern of PtPCP-like in different tobacco lines was examined using qRT-PCR. Results showed that PtPCP-like was expressed higher in all transgenic lines than in wide type,and significant expression differences were seen among different transgenic lines. |
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| Keywords: | Populus tomentosa tobacco qRT-PCR PtPCP-like |
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