| 月季丁香酚合成酶基因RhEGS1的克隆及表达分析 |
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| 引用本文： | 晏慧君,张颢,蹇洪英,王其刚,邱显钦,张婷,唐开学.月季丁香酚合成酶基因RhEGS1的克隆及表达分析[J].中国农业科学,2012,45(3):590-597. |
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| 作者姓名： | 晏慧君 张颢 蹇洪英 王其刚 邱显钦 张婷 唐开学 |
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| 作者单位： | 1.云南省农业科学院花卉研究所/云南省花卉育种重点实验室，昆明 650205 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，云南省青年基金，国家"863"计划项目 |
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| 摘 要： | 【目的】克隆月季丁香酚合成酶基因RhEGS1的全长cDNA序列，分析其序列及表达特征，并对该基因编码的蛋白进行原核表达分析，为深入探讨丁香酚合成酶的生化特性奠定基础。【方法】根据已发表的其它植物EGS基因序列的保守结构域设计简并引物，结合RACE技术，获得RhEGS1的全长cDNA序列，并进行生物信息学分析；利用半定量RT-PCR对不同组织及不同花发育时期RhEGS1进行表达分析。采用Gateway克隆技术，构建原核表达载体，并进行原核蛋白表达。【结果】月季RhEGS1 的cDNA全长为1 207 bp，包含一个927 bp的ORF，编码309个氨基酸。同源序列比对发现RhEGS1与仙女扇的CbEGS2有83.87%的同源性，与矮牵牛PhEGS1具有81.55%同源性。表达谱分析表明，RhEGS1主要在雄蕊中表达, 且在花盛开期表达最强，而在花蕾期及凋谢期表达较弱。原核表达分析发现，在37℃、0.5 mmol•L-1 IPTG 诱导4 h 后，携带RhEGS1 ORF 的原核表达载体在大肠杆菌中生成了大量的分子量约为35 kD 的蛋白质，其分子量大小与预测的理论值相一致。【结论】从月季雄蕊中克隆到丁香酚合成酶基因RhEGS1，具有EGS基因的结构特征和完整的编码框，且在盛开期雄蕊中表达量最高。
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| 关 键 词： | 月季 丁香酚合成酶基因 RT-PCR Gateway克隆 原核表达 |
| 收稿时间： | 2011-08-10 |
Cloning and Expression Analysis of Eugenol Synthase Gene (RhEGS1) in Cut Rose (Rosa hybrida) |
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| YAN Hui-jun
,
ZHANG Hao
,
JIAN Hong-ying
,
WANG Qi-gang
,
QIU Xian-qin
,
ZHANG Ting
,
TANG Kai-xue.Cloning and Expression Analysis of Eugenol Synthase Gene (RhEGS1) in Cut Rose (Rosa hybrida)[J].Scientia Agricultura Sinica,2012,45(3):590-597. |
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| Authors: | YAN Hui-jun ZHANG Hao JIAN Hong-ying WANG Qi-gang QIU Xian-qin ZHANG Ting TANG Kai-xue |
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| Institution: | (Flower Research Institute of Yunnan Academy of Agricultural Sciences/Yunnan Flower Breeding Key Lab,Kunming 650205) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | rose(Rosa hybrida) RhEGS1 RT-PCR Gateway clone prokaryotic expression |
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