| 短枝型苹果MdRGL基因的克隆及原核表达分析 |
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| 引用本文： | 宋杨,张艳敏,刘美艳,王传增,刘金,冯守千,王延玲,陈学森.短枝型苹果MdRGL基因的克隆及原核表达分析[J].中国农业科学,2012,45(7):1347-1354. |
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| 作者姓名： | 宋杨 张艳敏 刘美艳 王传增 刘金 冯守千 王延玲 陈学森 |
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| 作者单位： | 山东农业大学园艺科学与工程学院/作物生物学国家重点实验室，山东泰安 271018 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31171932);国家重点基础研究发展计划项目(2011CB100606) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆短枝型苹果（Malus domestica Borkh.）的MdRGL基因，并对其进行生物信息学分析，构建该基因的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白，为明确短枝型苹果MdRGL基因与短枝芽变特性之间的关系奠定基础。【方法】采用同源克隆法，以短枝型苹果叶片总RNA为模板，通过RT-PCR获得短枝型苹果MdRGL的cDNA片段，T/A克隆后进行序列测定。将克隆到的短枝型苹果MdRGL克隆到表达载体pGEX-4T-1上，构建融合表达载体pGEX-4T-MdRGL，转化到大肠杆菌BL21（DE3）并诱导表达。【结果】从短枝型苹果中克隆到5条MdRGL基因：MdRGL1a/b、MdRGL2a/b和MdRGL3b。序列分析表明，除MdRGL3b外，另外4条序列都具有DELLA和VHYNP结构域。利用所构建的原核表达载体，经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳检测结果表明，表达蛋白与预期蛋白大小一致。【结论】短枝型苹果中DELLA蛋白的克隆和原核表达的成功，为进一步纯化和鉴定目的蛋白及研究其功能奠定了试验基础。
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| 关 键 词： | 短枝型苹果 DELLA蛋白 基因克隆 序列分析 原核表达 |
| 收稿时间： | 2011-11-01 |
Cloning and Prokaryotic Expression of MdRGL Gene from Spur-Type Apple(Malus domestica Borkh.) |
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| SONG Yang
,
ZHANG Yan-min
,
LIU Mei-yan
,
WANG Chuan-zeng
,
LIU Jin
,
FENG Shou-qian
,
WANG Yan-ling
,
CHEN Xue-sen.Cloning and Prokaryotic Expression of MdRGL Gene from Spur-Type Apple(Malus domestica Borkh.)[J].Scientia Agricultura Sinica,2012,45(7):1347-1354. |
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| Authors: | SONG Yang ZHANG Yan-min LIU Mei-yan WANG Chuan-zeng LIU Jin FENG Shou-qian WANG Yan-ling CHEN Xue-sen |
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| Institution: | (College of Horticulture Science and Engineering,Shandong Agricultural University/State Key Laboratory of Crop Biology,Taian 271018,Shandong) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | spur-type apple DELLA protein gene clone sequence analysis prokaryotic expression |
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