| DF-1细胞中TLR7编码基因的敲除及其抗FAdV-4感染的天然免疫应答 |
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| 引用本文： | 恽君雯,陈丽,徐悦,鲍熹,冯磊,高崧.DF-1细胞中TLR7编码基因的敲除及其抗FAdV-4感染的天然免疫应答[J].畜牧与兽医,2023(2):80-90. |
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| 作者姓名： | 恽君雯 陈丽 徐悦 鲍熹 冯磊 高崧 |
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| 作者单位： | 1. 江苏省生产力促进中心;2. 扬州大学兽医学院;3. 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所;4. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;5. 江苏大学药学院 |
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| 摘 要： | 旨在构建高质量的禽源细胞系，应用CRISPR/Cas9技术实现鸡胚成纤维细胞(DF-1)的Toll样受体7(TLR7)编码基因的敲除，构建稳定的细胞培养禽腺病毒4型(FAdV-4)增殖体系。采用荧光定量PCR的方法对FAdV-4感染DF-1细胞后先天性免疫信号通路中效应分子进行检测，选择转录水平显著上调的基因TLR7作为研究对象；构建sgRNA载体与Cas9表达载体共转染DF-1细胞，经绿色荧光蛋白(GFP)阳性特征分选单克隆，PCR验证及增毒试验筛选后获得TLR7编码序列敲除的DF-1-TLR7-KO#3单克隆细胞系，命名为DF-1-TLR7-KO细胞。对敲除前后DF-1细胞的天然免疫系统对FAdV-4感染的拮抗效应和病毒在不同细胞中增殖效率的差异进行了研究。结果表明：成功构建的TLR7编码序列敲除的DF-1细胞系，与原始细胞相比病毒增殖能力提高。试验对细胞的天然免疫系统与FAdV-4感染的互作机理进行了初步探索，为更好地研究宿主对病毒入侵的应答机制，提高疫苗生产效能提供了研究基础和生物材料储备。
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| 关 键 词： | 免疫应答 DF-1细胞 禽腺病毒4型 CRISPR/Cas9 Toll样受体7 |
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