| 猫疱疹病毒Ⅰ型、猫杯状病毒、支气管败血波氏杆菌多重荧光定量PCR检测方法的建立与应用 |
| |
| 引用本文： | 周红蕾,程淑琴,李佳鹏,刘涵,姚志兰,张蕾.猫疱疹病毒Ⅰ型、猫杯状病毒、支气管败血波氏杆菌多重荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J].畜牧与兽医,2023(3):130-138. |
| |
| 作者姓名： | 周红蕾 程淑琴 李佳鹏 刘涵 姚志兰 张蕾 |
| |
| 作者单位： | 1. 江苏农牧科技职业学院;2. 吉林大学 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金项目(32002157)； |
| |
| 摘 要： | 旨在建立检测猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus 1,FHV-1)、猫杯状病毒(Feline calicivirus, FCV)、支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)多重TaqMan荧光定量PCR方法。基于FHV-1的胸苷激酶(TK)基因、FCV的衣壳蛋白VP1基因、Bb的皮肤坏死毒素基因(DNT1)序列保守区域设计并合成TaqMan荧光定量PCR引物和探针，以FHV-1、FCV、Bb、猫细小病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌为模板验证引物和探针的特异性。制备重组质粒pMD18T-FHV-TK、pMD18T-FCV-VP1、pMD18T-Bb-DNT1作为标准品，经矩阵法确定最佳反应体系。以10倍梯度稀释的标准品为模板检测方法的灵敏性。应用建立的方法对32份临床具有上呼吸道感染症状的猫眼、口、鼻拭子检测，以评估该方法的可行性。结果显示：该方法可特异性检出FHV-1、FCV、Bb,且与猫细小病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌无交叉反应；灵敏度试验表明该方法对FHV-1、FCV、Bb的最低检出限分别为10、10和100拷贝/μL;应用该方法从3...
|
| 关 键 词： | 猫疱疹病毒Ⅰ型 猫杯状病毒 支气管败血波氏杆菌 TaqMan荧光定量PCR |
|
|
