| 狂犬病病毒微滴式数字PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 李鑫,鞠厚斌,葛菲菲,杨德全,沈海潇,王建,赵洪进.狂犬病病毒微滴式数字PCR检测方法的建立[J].中国兽医杂志,2023(3):41-45. |
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| 作者姓名： | 李鑫 鞠厚斌 葛菲菲 杨德全 沈海潇 王建 赵洪进 |
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| 作者单位： | 上海市动物疫病预防控制中心 |
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| 基金项目： | 上海市“科技创新行动计划”技术标准项目(20DZ2200200)； |
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| 摘 要： | 为了建立可绝对定量狂犬病病毒(RABV)的微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法，本试验根据RABV基因组起始区域设计引物和探针，继而优化引物和探针浓度以及退火温度，并对建立的ddPCR方法的灵敏度、特异性和重复性进行分析。结果显示：ddPCR方法的最佳引物和探针浓度分别为900 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度为55℃;ddPCR方法的标准曲线相关系数(R2)为0.999,呈现良好的线性关系；灵敏度高，最低可检测到3.37 copies/μL;特异性良好，与常见犬病原无交叉反应；重复性好，检测结果稳定。临床样品的检测结果显示，本试验建立的狂犬病病毒ddPCR方法与实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)方法的符合率为100%。结果表明，本试验建立的狂犬病病毒微滴式数字PCR方法灵敏度高、特异性强，可用于狂犬病病毒的绝对定量检测。
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| 关 键 词： | 狂犬病 微滴式数字PCR 检测方法 |
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