| 非洲猪瘟病毒多重PMA-qPCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 卓玛,钱炳旭,吴晓东,戴建君,薛峰.非洲猪瘟病毒多重PMA-qPCR检测方法的建立及应用[J].畜牧与兽医,2023(4):93-101. |
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| 作者姓名： | 卓玛 钱炳旭 吴晓东 戴建君 薛峰 |
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| 作者单位： | 1. 教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室;2. 南京农业大学三亚学院;3. 中国动物卫生与流行病学中心 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2021YFD1800500,2020YFA0910200)；;江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(21)2038]； |
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| 摘 要： | 本研究利用叠氮溴化丙锭(PMA)与多重荧光定量PCR(qPCR)技术相结合，建立了一种可以实现非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染性与非感染性(活/死病毒)鉴别的检测方法。通过对ASFV p72、CD2v、MGF110-14L基因保守序列设计特异性引物及探针，建立p72、CD2v、MGF110-14L基因的多重qPCR检测方法。结果显示，本研究建立的多重qPCR检测方法具有较强特异性，与其他常见猪病毒性原无交叉反应；同时，该方法具有较高灵敏度，p72、CD2v、MGF110-14L基因的重组质粒标准品最低检出限均为102copies/μL。为弥补qPCR技术不能有效区分样品中活/死病毒的缺陷，本研究将构建的多重qPCR与PMA技术相结合。当加入PMA终浓度为10μg/mL、暗孵育10 min、光照强度40 W、光照15 min时，PMA能够抑制灭活病毒基因的扩增且对活病毒基因的扩增无影响；对比普通qPCR与多重PMA-qPCR的灵敏度可知，两者的灵敏度均为102 copies/μL;将多重PMA-q...
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 多重PMA-qPCR 基因缺失株 感染性病毒 |
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