| 猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体双重荧光PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 于新友,李天芝,李书光,刘新江,李振伟,沈志强,肖跃强.猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体双重荧光PCR检测方法的建立[J].中国兽医杂志,2023(6):60-64. |
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| 作者姓名： | 于新友 李天芝 李书光 刘新江 李振伟 沈志强 肖跃强 |
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| 作者单位： | 1. 山东省滨州畜牧兽医研究院;2. 山东绿都生物科技有限公司;3. 威海市文登区动物疫病预防控制中心 |
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| 基金项目： | 山东省自然科学基金项目(ZR2014CM047)； |
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| 摘 要： | 为了建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪肺炎支原体(Mhp)的双重荧光PCR检测方法，本试验根据NCBI数据库中的PRRSV ORF7和Mhp P36基因，分别设计引物和TaqMan探针，通过优化扩增反应条件，建立PRRSV和Mhp的双重荧光PCR检测方法；分析所建立PCR方法的特异性、敏感性和重复性，并初步应用于临床样品检测。结果显示，25μL PCR反应体系中各引物最佳添加量：PRRSV-F 1.5μL、PRRSV-R 1.0μL、PRRSV-P 0.8μL、Mhp-F 1.2μL、Mhp-R 1.3μL、Mhp-P 0.7μL。优化后的PCR反应程序：50℃反转录20 min, 95℃预变性2 min, 95℃变性5 s, 55℃退火10 s, 72℃延伸20 s (此处收集荧光),40个循环。建立的双重荧光PCR方法特异性较好，与其他猪常见病原体无交叉反应；检测PRRSV和Mhp的敏感性分别为4.2拷贝/μL和9.6拷贝/μL;批内和批间变异系数均不高于2%,具有很好的重复性。因此，本试验建立的双重荧光PCR方法可同时检测PRRSV和Mhp,为猪繁殖与呼吸综合征...
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 猪肺炎支原体 双重荧光PCR 检测 |
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