| 巴东木莲DNA的提取及SRAP-PCR反应体系的正交优化 |
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| 引用本文： | 万玉华,余璐璐,李晓玲,陈发菊,梁宏伟,何正权.巴东木莲DNA的提取及SRAP-PCR反应体系的正交优化[J].湖北农业科学,2008,47(9). |
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| 作者姓名： | 万玉华 余璐璐 李晓玲 陈发菊 梁宏伟 何正权 |
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| 作者单位： | 三峡大学化学与生命科学学院生物技术研究中心/天然产物研究与利用湖北省重点实验室,湖北,宜昌,443002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，湖北省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 研究确定了提取巴东木莲基因组DNA的方法,采用正交试验设计法对影响SRAP-PCR反应的引物浓度、Taq DNA聚合酶的用量、Mg2 和dNTPs浓度及PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了比较、优化.同时对DNA模板浓度进行了筛选.结果表明,Mg2 、dNTPs、Taq酶及引物的不同水平均对PCR反应结果有显著的影响.建立了巴东木莲20μL SRAP-PCR的反应体系为lxbuffer、Mg2 浓度为2.O mmol.L-1、dNTPs浓度为O.25 mmol·L-1、引物浓度为0.45μmol·L-1、Taq酶为0.5 U和模板DNA 40ng.适宜的扩增程序为94℃预变性1 min,94℃变性1 min,33℃复性1 min,72℃延伸1 min,10个循环;94℃变性1 min.55℃复性l min,72℃延伸1 rain,30个循环;最后72℃延伸5min.试验表明,该体系重复性好、稳定性强.
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| 关 键 词： | 巴东木莲 DNA提取 SRAp-PCR反应体系 正交设计 优化 |
Isolation of Genomic DNA and Optimization of the SRAP-PCR Reaction System by Orthogonal Design in Manglietia patungensis |
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| WAN Yu-hua,YU Lu-lu,LI Xiao-ling,CHEN Fa-ju,LIANG Hong-wei,HE Zheng-quan.Isolation of Genomic DNA and Optimization of the SRAP-PCR Reaction System by Orthogonal Design in Manglietia patungensis[J].Hubei Agricultural Sciences,2008,47(9). |
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| Authors: | WAN Yu-hua YU Lu-lu LI Xiao-ling CHEN Fa-ju LIANG Hong-wei HE Zheng-quan |
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| Institution: | WAN Yu-hua,YU Lu-lu,LI Xiao-ling,CHEN Fa-ju,LIANG Hong-wei,HE Zheng-quan(College of Chemistry , Life Science,Biotechnology Research Center,Hubei Provincial Key Laboratory of Natural Products Research , Development,Three Gorges University,Yichang 443002,Hubei,China) |
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| Abstract: | An efficient method for isolation of high quality genomic DNA from Manglietia patungensis was determined.Some factors involving primer,Taq DNA polymerase,Mg2+,dNTPs,annealing temperature and cycle times affecting the SRAP-PCR researching system were optimized.And the concentration of genomic DNA templates were filtrated at the same time.The results showed that Mg2+,dNTPs,Taq polymerase and primer in different levels had the marked influence on the result of PCR.The optimal PCR reaction system for M.patungne... |
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| Keywords: | Manglietia patungensis DNA isolation SRAP-PCR reaction system orthogonal design optimization |
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