| Marc145细胞SHP-1、SHP-2结构域的克隆表达及抗体的制备与纯化 |
| |
| 作者单位： | ;1.河南农业大学牧医工程学院 |
| |
| 摘 要： | 应用RT-PCR技术从Marc145细胞中克隆出SHP-1、SHP-2结构域基因的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-SHP-1、pET-SHP-2,转化大肠杆菌BL21,在IPTG的诱导下成功表达相对分子质量大小约为37 500、40 100的融合蛋白,将纯化过的融合蛋白分别免疫小鼠,制备鼠源血清,采用间接ELISA和Western Blot试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的血清效价为1∶12 800;Western Blot试验结果证明,制备的鼠抗pET-SHP-1、pET-SHP-2多克隆抗体可以与重组蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。采用硫酸铵盐析与DE-52离子交换层析相结合的方法提取并纯化血清得到纯度较高的鼠抗SHP-1、SHP-2抗体IgG。结果验证了Marc145细胞SHP-1、SHP-2的存在,克隆出了Marc145细胞SHP-1、SHP-2结构域基因并成功表达,为后续试验和研究奠定了基础。
|
| 关 键 词： | SHP-1 SHP-2 克隆 原核表达 多克隆抗体 |
Cloning and expression of the structure domain of SHP-1,SHP-2 from Marc145 cell and preparation of polyclonal antibodies |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
