贵宾犬α-干扰素基因的扩增、克隆与序列分析 |
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引用本文: | 宋亚鹏,陈红英,崔保安,贾艳艳,郭显坡,张蕾.贵宾犬α-干扰素基因的扩增、克隆与序列分析[J].江苏农业学报,2010,26(2). |
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作者姓名: | 宋亚鹏 陈红英 崔保安 贾艳艳 郭显坡 张蕾 |
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作者单位: | 河南农业大学牧医工程学院,河南,郑州,450002 |
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基金项目: | 国家农业科技成果转化基金项目(2007BAD07A06) |
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摘 要: | 参照基因库中收录的犬α-干扰素基因序列设计1对引物,应用PCR技术直接从贵宾犬肝组织基因组DNA中扩增IFN-α基因,将回收得到的特异性片段克隆于pGEM-T Easy载体中,转化感受态细胞DH5α,经蓝白斑筛选,质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性重组质粒,测定其核苷酸序列。测序结果表明,贵宾犬α-干扰素基因全长为564 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码187个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有3个潜在的N-糖基化位点,有10个与二硫键形成有关的半胱氨酸。用DNAStar软件将所得序列与人和其他种动物的IFN-α基因进行核苷酸及氨基酸同源性比较,并通过绘制系统进化树可知,IFN-α基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高。
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关 键 词: | 犬 IFN-α 扩增 基因克隆 序列分析 |
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