| 牛星状病毒ORF2基因遗传进化分析及原核表达 |
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| 引用本文： | 武琦,周金柱,钟纯燕,李基棕,李科茫,索朗斯珠,贡嘎,李彬.牛星状病毒ORF2基因遗传进化分析及原核表达[J].畜牧与兽医,2022(10):81-88. |
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| 作者姓名： | 武琦 周金柱 钟纯燕 李基棕 李科茫 索朗斯珠 贡嘎 李彬 |
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| 作者单位： | 1. 西藏农牧学院动物科学学院;2. 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室;3. 黔西南民族职业技术学院;4. 南京农业大学动物医学院 |
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| 基金项目： | 十四五国家重点研发计划(2021YFD1801101)；;江苏省农业科技自主创新资金(CX(20)3094)；;江苏省自然科学基金(BK20190003)；;国家现代农业产业技术体系(CARS-37)； |
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| 摘 要： | 为了解牛星状病毒(bovine astrovirus, BoAstV)ORF2基因的遗传进化并获得原核表达的衣壳蛋白，从牛腹泻粪便中提取总RNA,扩增BoAstV ORF2基因，将ORF2基因克隆至pMD19-T载体中并测序，利用生物信息学软件分析基因的遗传进化。将位于BoAstV衣壳蛋白高度保守区的ORF2-1200基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中，构建重组原核表达载体pET28a-ORF2-1200。将重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达并优化诱导条件，经过超声破碎离心并鉴定蛋白可溶性，最后利用亲和层析镍柱对重组蛋白进行纯化和Western blot鉴定。结果表明：ORF2基因全长2 304 bp,编码768 aa, ORF2基因属MAstV-28基因型，与日本毒株Ishikawa24-6亲缘关系最近，与20个参考毒株的ORF2基因氨基酸同源性为53.2%～86.0%。试验成功构建了重组载体，经条件优化，在37℃,1.0 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h情况下蛋白表达量最高，目的蛋白大小55 kDa左右，目的蛋白以包...
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| 关 键 词： | 牛星状病毒 ORF2 遗传进化分析 原核表达 |
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