| 鸡毒害艾美耳球虫表面抗原基因(EnSAG)的克隆表达及其免疫保护力 |
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| 引用本文： | 张阿敏,李静怡,刘丹丹,高阳,王礼跃,樊峥嵘,李颖珊,冯茜茜,张知之,范雪莲,侯照峰,许金俊,陶建平.鸡毒害艾美耳球虫表面抗原基因(EnSAG)的克隆表达及其免疫保护力[J].畜牧与兽医,2022(10):122-128. |
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| 作者姓名： | 张阿敏 李静怡 刘丹丹 高阳 王礼跃 樊峥嵘 李颖珊 冯茜茜 张知之 范雪莲 侯照峰 许金俊 陶建平 |
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| 作者单位： | 扬州大学兽医学院/江苏动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31972698)； |
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| 摘 要： | 为了研究鸡毒害艾美耳球虫表面抗原基因(EnSAG)的功能，以毒害艾美耳球虫(扬州株)第二代裂殖子的总RNA为模板，RT-PCR扩增其EnSAG,连接至pGEM-T-Easy载体，鉴定后构建pET28a(+)-EnSAG表达载体，转化至大肠杆菌BL21,鉴定后进行诱导表达和纯化。用纯化重组蛋白免疫BALB/c小鼠，制备抗EnSAG蛋白的多克隆抗体。利用多克隆抗体，用Western blot技术检测子孢子和第二代裂殖子中的天然EnSAG蛋白。用重组蛋白按高剂量(200μg/羽)、中剂量(100μg/羽)和低剂量(50μg/羽)免疫雏鸡，同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照，以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数(ACI)为指标，评价重组蛋白的免疫保护力。结果显示：该基因全长768 bp,编码255个氨基酸，分子质量24.63 ku;重组蛋白大小约为30 ku,以包涵体形式为多，能被组氨酸单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别；在第二代裂殖子中检测到天然EnSAG蛋白，其分子质量大约为27 ku。各试验组的成活率均为100%;免疫组的平均增重增加，病变记分...
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| 关 键 词： | 毒害艾美耳球虫 表面抗原基因 克隆 表达 免疫保护力 |
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