| 新型黄病毒NALSV检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 车金,姜峰,陈瑶,毕誉丹,周奕辰,姜凤华,马永春,杨鹏飞,赵永祥,陈泽良,韩小虎.新型黄病毒NALSV检测方法的建立及应用[J].沈阳农业大学学报,2022(3):366-372. |
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| 作者姓名： | 车金 姜峰 陈瑶 毕誉丹 周奕辰 姜凤华 马永春 杨鹏飞 赵永祥 陈泽良 韩小虎 |
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| 作者单位： | 1. 沈阳农业大学重要家畜疫病研究教育部重点实验室;2. 辽宁省动物疫病预防控制中心;3. 丹东市农业农村发展服务中心;4. 丹东市第六人民医院 |
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| 摘 要： | 蜱是多种病原体的储存宿主和传播媒介，近年来由蜱体内新发现了多种潜在的人兽共患病病原，因此对蜱所携带病原的早期识别和建立相应的检测与防范措施尤为重要。对辽宁省部分地区采集的长角血蜱样本进行宏转录组测序，发现其中存在一种新的黄病毒科病毒成员，是潜在的人兽共患病病原。为建立针对该病毒快速、灵敏的检测方法，选择其糖蛋白VP1基因进行引物探针设计，通过对反应条件及反应体系的优化，建立了基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR检测方法，标准方程为y=-3.4436x+33.063，相关系数（R2）为0.9999；此方法可检出最低拷贝数为2.5×10copies·μL-1，与普通PCR相比，灵敏度提高约104倍，具有良好的灵敏度；与其他相近病毒的阳性质粒进行反应均无扩增，说明其具有良好的特异性；实验结果的变异系数均低于0.5%，重复性良好；对不同浓度质粒在不同时间进行反应，CT值无显著变化，稳定性良好。采用本方法对2020及2021年采集于辽宁省及内蒙古自治区的18个地区540头蜱进行检测，发现阳性样本数为234头，阳性率为43.3%。结果表明：所建立的实时荧光定量PCR检测方法具有特异性强，灵敏度...
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| 关 键 词： | 蜱 实时荧光定量PCR TaqMan探针 检测 |
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