| 原代犬小肠上皮细胞的分离培养与鉴定 |
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| 引用本文： | 赵艺越,马勋,郝科兴,王正荣,王静,薄新文.原代犬小肠上皮细胞的分离培养与鉴定[J].畜牧与兽医,2022(10):52-57. |
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| 作者姓名： | 赵艺越 马勋 郝科兴 王正荣 王静 薄新文 |
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| 作者单位： | 1. 石河子大学动物科技学院;2. 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所/省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室 |
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| 摘 要： | 旨在建立原代犬小肠上皮细胞分离培养及纯化的方法，为犬肠道病毒性、细菌性及寄生虫相关疾病研究提供细胞材料。采用组织块培养法分离培养原代犬小肠上皮细胞，胰酶差速消化法进行纯化，利用细胞形态学、间接免疫荧光法鉴定上皮细胞特性，脂多糖(LPS)刺激原代上皮细胞，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测炎性因子转录水平，鉴定原代犬小肠上皮细胞的功能。结果显示：组织块培养法获得的原代犬小肠上皮细胞可在24 h内贴壁，第3天细胞开始增殖，第4天时达到增殖顶峰，第5～7天细胞活性逐渐降低，在体外连续传代可培养至第10代。经胰蛋白酶差速消化纯化后，获得铺路石样原代犬小肠上皮细胞，生长曲线类似“S”形，上皮细胞特异性细胞角蛋白18 (CK18)鉴定呈阳性，LPS可诱导犬小肠原代上皮细胞炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的转录水平在12 h(P<0.05)、24 h(P<0.01)表达量呈显著和极显著差异。研究表明，利用组织块培养法可成功分离获得数量较多、纯度较高且具有典型上皮细胞形态和功能的犬小肠上皮细...
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| 关 键 词： | 犬小肠上皮细胞 原代培养 纯化 |
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