| 转基因棉花MON757转化体特异性PCR检测方法及应用 |
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| 引用本文： | 杨阳,王叶,范金杰,谢家建,彭于发.转基因棉花MON757转化体特异性PCR检测方法及应用[J].农业生物技术学报,2016(6):908-918. |
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| 作者姓名： | 杨阳 王叶 范金杰 谢家建 彭于发 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院植物保护研究所/农业部转基因环境安全及植物抗性监督检验测试中心(北京)/植物病虫害生物学国家重点实验室,北京,100193 |
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| 基金项目： | 转基因新品种培育重大科技项目(No.2014ZX08012-01B) |
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| 摘 要： | 转基因棉花(Gossypium hirsutum)MON757转化体是孟山都公司研发的转cryIAc基因的抗虫棉,在美国、加拿大、澳大利亚等国被批准种植或允许用作食品饲料原料,但在我国尚未获得批准种植和应用.目前国内外尚没有转基因棉花MON757特异性的纯杂合检测和定量检测方法报道.为了检测我国棉花中MON757转化体的存在情况,本研究以转基因棉花MON757转化体的插入位点基因组序列和外源插入片段/基因组连接区序列为靶标,建立了特异性的MON757转化体纯杂合定性PCR检测方法和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测方法.所建立的MON757转化体纯杂合定性PCR检测方法的检测引物由分别位于MON757外源基因插入位点两侧基因组和外源插入片段上的3条引物组成,能准确地鉴别棉花植株和种子中MON757转化体的纯合、杂合状态.建立的MON757转化体特异性的qRT-PCR检测方法具有良好的可重复性和灵敏度,其检测下限(limit of detection,LOD)为11个拷贝,定量下限(limit of quantitative,LOQ)为44个拷贝.用此方法对2014年湖北省的49份商品棉花种子进行了检测,结果有5份种子样品检测到MON757转化体.采用MON757转化体纯杂合定性PCR检测方法对这5份种子样品各60个单粒分别进行了检测,同时采用qRT-PCR检测方法对这5份种子样品进行定量测定.结果表明,有1份含量在1.5％左右,4份含量超过了20％,两种方法的测定结果基本一致.本研究建立的MON757转化体纯杂合定性PCR检测方法和qRT-PCR检测方法在田间棉花植株和种子中MON757转化体纯杂合状态的测定以及混合样品中MON757转化体含量的测定方面都具有重要的应用价值.
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| 关 键 词： | 转基因棉花 MON757 定性PCR 定量PCR 纯杂合 |
Event-specific PCR Detection Methods of Genetically Modified Cotton (Gossypium hirsutum) MON757 and Their Application |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Transgenic cotton MON757 Qualitative PCR Quantitative PCR Homozygous/heterozygous |
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