| 甘蓝ROH1与EXO70A1的表达与相互作用 |
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| 引用本文： | 张贺翠,柳菁,廉小平,曾静,杨昆,张学杰,杨丹,施松梅,高启国,朱利泉.甘蓝ROH1与EXO70A1的表达与相互作用[J].中国农业科学,2016,49(4):775-783. |
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| 作者姓名： | 张贺翠 柳菁 廉小平 曾静 杨昆 张学杰 杨丹 施松梅 高启国 朱利泉 |
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| 作者单位： | 1西南大学农学与生物科技学院，重庆 400716
2西南大学重庆市蔬菜重点实验室，重庆 400716
3重庆市烟草公司黔江分公司，重庆 409000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31572127）、重庆市自然基金重点项目（cstc2012jjB80010）、重庆市前沿与应用基础研究项目（cstc2013jcyjA80010）、中央高校基本业务费专项（XDJK2013C121） |
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| 摘 要： | 【目的】以自交不亲和材料甘蓝为研究对象，分析ROH1的组织表达、ROH1与EXO70A1的相互作用及其是否参与甘蓝生殖发育。【方法】从甘蓝花蕾中克隆出ROH1和EXO70A1，应用半定量RT-PCR检测ROH1的表达特性；应用实时荧光定量PCR进一步分析甘蓝授粉后1 h内ROH1和EXO70A1的表达量和二者的相关性；分别构建以pGBKT7为载体的EXO70A1重组“诱饵”质粒和以pGADT7为载体ROH1的重组猎物质粒，并将重组质粒转化酵母菌株，利用缺陷型培养基进行蛋白质相互作用检测，确定ROH1和EXO70A1是否存在相互作用。【结果】在甘蓝中ROH1为单外显子基因，编码含398个氨基酸残基的蛋白质，与拟南芥ROH1对比发现，甘蓝ROH1序列内存在一个连续 16个氨基酸残基的缺失；它在甘蓝的雄蕊（花药）、花柱、幼茎、幼根及叶片中均有表达但表达量差异明显，其中，在幼叶、花柱和雄蕊（花药）中的表达量较高，在幼根和幼茎中的表达量较低；甘蓝授粉后柱头中ROH1的表达量在1 h内呈现出“上升-下降-上升”趋势，其中，以授粉后30 min的表达量最低，授粉后1 h的表达量达到最高值；而EXO70A1在授粉后1 h内的表达呈现出“下降-上升”的趋势，并以授粉15 min 时表达量最低，授粉后1 h时的表达量最高；二者表达的动态变化说明ROH1和EXO70A1参与了甘蓝的生殖发育；ROH1与EXO70A1的表达量趋势线呈现出负相关性，并在30 min时出现了重叠区域，预示ROH1与EXO70A1之间可能存在相互作用；成功构建pGADT7-ROH1和pGBKT7-EXO70A1酵母表达载体，通过酵母双杂交试验，发现载体pGBKT7-EXO70A1无自激活能力，融合菌株同时激活4个报告基因（AUR1-C、MEL1、HIS3 和 ADE2）的表达，表明花药中ROH1和花柱中的EXO70A1之间存在较强的相互作用。【结论】甘蓝的ROH1和EXO70A1之间存在较强的相互作用并呈现出负相关性，ROH1可能通过调节EXO70A1在柱头的分泌影响生殖发育。
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| 关 键 词： | 甘蓝 ROH1 EXO70A1 酵母双杂交 |
| 收稿时间： | 2015-09-10 |
Expression and Interaction Between ROH1 and EXO70A1 in Reproductive Development |
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| ZHANG He-cui,LIU Jing,LIAN Xiao-ping,ZENG Jing,YANG Kun,ZHANG Xue-jie,YANG Dan,SHI Song-mei,GAO Qi-guo,ZHU Li-quan.Expression and Interaction Between ROH1 and EXO70A1 in Reproductive Development[J].Scientia Agricultura Sinica,2016,49(4):775-783. |
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| Authors: | ZHANG He-cui LIU Jing LIAN Xiao-ping ZENG Jing YANG Kun ZHANG Xue-jie YANG Dan SHI Song-mei GAO Qi-guo ZHU Li-quan |
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| Institution: | 1College of Agronomy and Biotechnology, Southwest University, Chongqing 400716
2Key Laboratory in Olericulture of Chongqing, Southwest University, Chongqing 400716
3 Chongqing Tobacco Company Qianjing District Branch, Chongqing 409000 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Brassica oleracea ROH1 EXO70A1 yeast two-hybrid system |
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