| 家蚕表皮蛋白BmCPAP3-G的表达特征及其与几丁质的结合特性 |
| |
| 引用本文： | 张薇薇,董照明,张艳,张晓璐,张守亚,赵萍.家蚕表皮蛋白BmCPAP3-G的表达特征及其与几丁质的结合特性[J].中国农业科学,2017,50(9):1723-1733. |
| |
| 作者姓名： | 张薇薇 董照明 张艳 张晓璐 张守亚 赵萍 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金（31530071，31472154）、西南大学博士基金项目（SWU116076）赵萍，Tel：023-68250885；E-mail：zhaop@swu.edu.cn |
| |
| 摘 要： | 【目的】探讨家蚕(Bombyx mori)表皮蛋白BmCPAP3-G的表达特征及与几丁质的结合方式,为家蚕表皮蛋白的功能研究提供依据。【方法】应用生物信息学方法分析家蚕CPAP家族表皮蛋白及BmCPAP3-G的结构域的序列特征;利用原核表达的方法表达BmCPAP3-G的融合蛋白,通过镍柱亲和层析技术纯化可溶性蛋白,利用5800 MALDI-TOF/TOF质谱鉴定正确后进行多克隆抗体制备,并利用几丁质亲和层析技术验证BmCPAP3-G与几丁质的结合;利用半定量RT-PCR和Western blot方法对BmCPAP3-G的组织和时期表达情况进行检测;利用几丁质亲和层析技术探讨体外BmCPAP3-G的结构域与几丁质结合能力强弱的关系。【结果】BmCPAP3-G蛋白具有18个氨基酸组成的信号肽,分子量为27 k D,等电点为4.82,位于第15号染色体上,由3个相同的Cht BD2结构域组成,并且其结构域中的半胱氨酸和芳香族氨基酸的同源性较高;对BmCPAP3-G进行了克隆和原核表达,并利用镍柱亲和层析技术纯化到了较纯的可溶性蛋白,经5800 MALDI-TOF/TOF鉴定正确后制备了其多克隆抗体,通过几丁质亲和层析技术验证了BmCPAP3-G能够与几丁质进行结合;利用半定量RT-PCR和Western blot的方法对BmCPAP3-G的组织和时期表达情况进行检测,发现转录水平和蛋白水平的结果一致,BmCPAP3-G在头和表皮中的表达量较高,在中肠、生殖腺和丝腺中的表达量较低,从表皮和丝腺的时期表达情况分析BmCPAP3-G在4龄眠期的表达量最高,随着5龄期的进行表达量呈逐渐下降的趋势;为了探讨BmCPAP3-G结构域与几丁质结合的关系,对该蛋白的结构域进行原核表达及镍柱亲和层析纯化,成功纯化了有活性的结构域3、结构域1-2、结构域2-3,将这3个结构域进行几丁质亲和层析验证其与几丁质的结合能力,发现它们均能够与几丁质进行结合,但是结合能力有差异,结构域3相比于结构域1-2和结构域2-3的结合能力要弱,即两个结构域比单个结构域与几丁质的结合能力强。【结论】BmCPAP3-G为典型的CPAP家族的表皮蛋白,可能参与几丁质层在眠期的降解再形成过程。BmCPAP3-G单个Cht BD2结构域就能够与几丁质结合,但多个结构域的同时存在加强了其与几丁质的结合能力。
|
| 关 键 词： | 家蚕 表皮蛋白 CPAP 表达谱 几丁质结合 /> |
| 收稿时间： | 2016-11-08 |
Expression Pattern and Chitin-Binding Mode Analyses of Cuticle Protein BmCPAP3-G in the Silkworm (Bombyx mori) |
| |
| ZHANG WeiWei,DONG ZhaoMing,ZHANG Yan,ZHANG XiaoLu,ZHANG ShouYa,ZHAO Ping.Expression Pattern and Chitin-Binding Mode Analyses of Cuticle Protein BmCPAP3-G in the Silkworm (Bombyx mori)[J].Scientia Agricultura Sinica,2017,50(9):1723-1733. |
| |
| Authors: | ZHANG WeiWei DONG ZhaoMing ZHANG Yan ZHANG XiaoLu ZHANG ShouYa ZHAO Ping |
| |
| Institution: | State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, Southwest University, Chongqing 400716 |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | silkworm (Bombyx mori) cuticular proteins CPAP expression pattern chitin-binding |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国农业科学》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国农业科学》下载免费的PDF全文 |
|
