| 大豆锌指转录因子GmDi19-5对高温的响应及互作蛋白的筛选 |
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| 引用本文： | 赵娟莹,刘佳明,冯志娟,陈明,周永斌,陈隽,徐兆师,郭长虹.大豆锌指转录因子GmDi19-5对高温的响应及互作蛋白的筛选[J].中国农业科学,2017,50(12):2389-2398. |
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| 作者姓名： | 赵娟莹 刘佳明 冯志娟 陈明 周永斌 陈隽 徐兆师 郭长虹 |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育科技重大专项（2014ZX08009-016B，2016ZX08002-002和2016ZX08004-002） |
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| 摘 要： | 【目的】高温胁迫已经成为威胁作物生长发育的主要非生物胁迫因素之一,转录因子在植物非生物胁迫响应中起着重要作用。通过对大豆锌指转录因子基因Gm Di19-5在高温胁迫下的响应和功能鉴定,以及利用酵母双杂交技术从大豆c DNA文库筛选与其互作的候选蛋白,研究Gm Di19-5对高温胁迫的响应机制。【方法】以大豆c DNA为模板,利用实时荧光定量PCR检测Gm Di19-5在高温处理不同时间段的表达模式;通过Plant CARE和PLACE数据库预测Gm Di19-5启动子元件,并对Gm Di19-5启动子转基因拟南芥在高温处理下进行的组织化学染色,分析Gm Di19-5启动子在高温胁迫下的活性;构建p GBKT7-Gm Di19-5诱饵载体,验证自激活活性;利用酵母双杂交技术,以p GBKT7-Gm Di19-5为诱饵筛选大豆c DNA文库,筛选与其互作的候选蛋白;进一步用酵母双杂交系统验证Gm Di19-5与候选蛋白的互作;利用实时荧光定量PCR检测候选蛋白基因在对高温处理的响应情况;构建融合表达载体,用GFP-Gm Di19-5融合表达载体转化拟南芥原生质体,检测Gm Di19-5蛋白的亚细胞定位情况。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,Gm Di19-5在高温胁迫下上调表达;启动子元件分析表明,Gm Di19-5包含多种与胁迫应答相关的顺式作用元件,包括热响应元件HSE;组织化学染色分析发现,经高温处理后,过表达拟南芥幼苗的地上部分和地下部分均有报告基因的表达;亚细胞定位结果表明,Gm Di19-5蛋白定位于拟南芥原生质体的细胞核中;通过酵母双杂交技术筛选到了与Gm Di19-5互作的候选蛋白,试验进一步验证了Gm Di19-5与Gm Dna J在酵母细胞中互作;另外,实时荧光定量PCR结果显示,互作蛋白基因Gm Dna J受高温胁迫诱导表达。【结论】Gm Di19-5受高温诱导表达,Gm Di19-5可能与Gm Dna J互作,表明Gm Di19-5功能的发挥可能需要Gm Dna J的参与。
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| 关 键 词： | 大豆 锌指转录因子 高温 酵母双杂交 蛋白互作 |
| 收稿时间： | 2016-12-20 |
The Response to Heat and Screening of the Interacting Proteins of Zinc Finger Protein GmDi19-5 in Soybean |
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| ZHAO JuanYing,LIU JiaMing,FENG ZhiJuan,CHEN Ming,ZHOU YongBin,CHEN Jun,XU ZhaoShi,GUO ChangHong.The Response to Heat and Screening of the Interacting Proteins of Zinc Finger Protein GmDi19-5 in Soybean[J].Scientia Agricultura Sinica,2017,50(12):2389-2398. |
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| Authors: | ZHAO JuanYing LIU JiaMing FENG ZhiJuan CHEN Ming ZHOU YongBin CHEN Jun XU ZhaoShi GUO ChangHong |
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| Institution: | 1. College of Life Science and Technology, Harbin Normal University/Key Laboratory of Molecular Cytogenetics and Genetic Breeding of Heilongjiang Province, Harbin 150025;2.Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences / National Key Facility for Crop Gene Resources and Genetic Improvement/Key Laboratory of Biology and Genetic Improvement of Triticeae Crops, Ministry of Agriculture, Beijing 100081 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Glycine max zinc finger protein high temperature yeast two-hybrid protein interaction |
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