| 小反刍兽疫病毒N、H和F蛋白的真核表达 |
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| 引用本文： | 田晓灵,赵永刚,包静月,王志亮,李金明,吴树清.小反刍兽疫病毒N、H和F蛋白的真核表达[J].中国动物检疫,2009,26(8):31-34. |
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| 作者姓名： | 田晓灵 赵永刚 包静月 王志亮 李金明 吴树清 |
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| 作者单位： | 1. 中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心,山东青岛,266032;内蒙古农业大学,内蒙古呼和浩特,010019
2. 中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心,山东青岛,266032
3. 内蒙古农业大学,内蒙古呼和浩特,010019 |
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| 基金项目： | 引进国际先进农业科学技术计划(948计划) |
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| 摘 要： | 目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H、N、F、NF重组真核表达质粒并观察其在真核细胞内的表达情况。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的N、H、F基因序列并克隆到真核表达载体pIRES1neo中,最后用PCR、酶切和序列分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒以磷酸钙介导法转染Vero细胞,用免疫荧光方法鉴定其在细胞中的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;重组质粒经pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1NF酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫病毒N、H、F蛋白基因序列完全一致,其大小分别为1575bp、1830bp和1641bp;将重组质粒感染真核细胞,经免疫荧光检测,证明所有蛋白均得到表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1NF,为继续进行基因免疫研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 小反刍兽疫病毒 真核表达 重组质粒 转染 |
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