| 朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的表达纯化及其酶活测定条件优化 |
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| 引用本文： | 彭博,师光禄,卜春亚,王有年.朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的表达纯化及其酶活测定条件优化[J].北京农学院学报,2015,30(4):9-14. |
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| 作者姓名： | 彭博 师光禄 卜春亚 王有年 |
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| 作者单位： | 北京农学院植物科学技术学院,北京102206;农业部都市农业(北方)重点开放实验室,北京102206;北京农学院生物科学与工程学院,北京102206;农业部都市农业(北方)重点开放实验室,北京102206 |
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| 基金项目： | 教育部科学技术重点研究项目，北京市教育委员会科技计划面上项目，北京市教育委员会平台项目，国家自然科学基金青年科学基金，北京市自然科学基金 |
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| 摘 要： | 乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是生物体内保证神经信号正常传递的关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标。现研究拟采用发酵罐培养含pET-30a/ace的表达菌株E.coli BL21(DE3),大量表达纯化螨AChE,利用单因素试验和正交试验优化AChE活性的测定条件。结果表明:发酵培养的重组菌株大量表达约为68kD的朱砂叶螨AChE蛋白。底物浓度、温度、pH和酶浓度等各测定因素对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性存在显著影响。确定朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性测定的最佳反应条件为:底物浓度1mmol/L,pH值7,温度35℃,酶浓度0.5mg/mL。通过体外发酵培养纯化获得了大量的朱砂叶螨AChE重组蛋白,确定了螨AChE活性测定的最佳条件,为进一步研究其酶学性质以及AChE抑制剂的体外筛选奠定基础。
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| 关 键 词： | 乙酰胆碱酯酶 朱砂叶螨 发酵 正交试验 方差分析 最适反应条件 |
Expression and purification of Tetranychus cinnabarinus acetylcholinesterase and its enzyme assay optimization |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Acetylcholinesterase Tetranychus cinnabarinus fermentation orthogonal experiment analysis of variance the optimum reaction conditions |
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