| 用磁珠富集法快速制备银鲫微卫星标记 |
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| 引用本文： | 姬长虹,孙效文.用磁珠富集法快速制备银鲫微卫星标记[J].大连水产学院学报,2007,22(6):460-464. |
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| 作者姓名： | 姬长虹 孙效文 |
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| 作者单位： | 1. 黑龙江水产研究所,农业部北方鱼类生物工程育种重点开放实验室,黑龙江,哈尔滨,150070;大连水产学院,生命科学与技术学院,辽宁,大连,116023
2. 黑龙江水产研究所,农业部北方鱼类生物工程育种重点开放实验室,黑龙江,哈尔滨,150070 |
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| 基金项目： | 国家科技条件平台建设项目 |
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| 摘 要： | 将磁珠富集法和用γ-32P标记的放射性探针法相结合,快速制备银鲫Carassius auratus gibelio微卫星。用限制性内切酶MboI对银鲫完整基因组DNA酶切,用不同蔗糖浓度梯度离心收集400~900 bp大小的片段,连接Brown接头,构建银鲫全基因组文库。用生物素标记的(CA)16寡核苷酸探针进行筛选,磁珠富集含有微卫星的DNA单链序列;对DNA模板进行PCR扩增,连接pMD18-T载体,转入用CaCl2制备的感受态大肠杆菌Escherichia coliDH5α中,得到微卫星序列文库;经用同位素γ-32P标记的探针(CA)16二次筛选,获得235个阳性克隆,对其测序,得224个含微卫星序列,完美型、非完美型、复合型序列分别占总数的52.8%、28.7%、18.5%。除探针中使用的(CA/GT)n重复单元外,还观察到(GA/CT)n、(ACTC)4的重复序列。设计163对引物,选择合成30对引物,经聚丙烯酰胺凝胶筛选,9对可以获得清晰条带,其中3对为单态,6对为多态。
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| 关 键 词： | 银鲫 微卫星 磁珠富集 |
| 文章编号： | 1000-9957（2007）06-0460-05 |
| 收稿时间： | 2007-06-06 |
| 修稿时间： | 2007年6月6日 |
Rapid isolation of microsatellites from genome of silvercrucian carp by magnetic beads |
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| JI Chang-hong,SUN Xiao-wen.Rapid isolation of microsatellites from genome of silvercrucian carp by magnetic beads[J].Journal of Dalian Fisheries University,2007,22(6):460-464. |
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| Authors: | JI Chang-hong SUN Xiao-wen |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Carassius auratus gibelio microsatellite enrichment by magnetic beads |
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