| 中国美利奴绵羊磷脂酶Czeta基因表达载体的构建及原核表达 |
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| 引用本文： | 木尔扎提·阿勒腾别克,刘强,贺志锐,王银龙,乌热力哈孜,赛务加甫.中国美利奴绵羊磷脂酶Czeta基因表达载体的构建及原核表达[J].动物医学进展,2014(12). |
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| 作者姓名： | 木尔扎提·阿勒腾别克 刘强 贺志锐 王银龙 乌热力哈孜 赛务加甫 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院,新疆石河子,832003 |
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| 摘 要： | 构建美利奴绵羊磷脂酶 C zeta（PLCζ）融合蛋白表达载体，并在原核细胞内表达及纯化，为其特异性抗体的制备及生物学功能研究奠定基础。用 PCR 技术扩增出 PLCζ基因片段，亚克隆到原核表达载体pCzn1中，导入 Arctic Express TM （DE3）感受态细胞，IPTG 诱导表达，收样后进行 SDS-PAGE 电泳或Western blot 检验 PLCζ的表达情况。用镍离子亲和层析的方法大量纯化融合蛋白。结果显示，重组质粒经 PCR、酶切和测序鉴定证明载体构建正确。pCzn1表达载体在 Arctic Express TM （DE3）表达菌中能很好地表达融合蛋白。表达纯化后可获得了分子量约74 ku 的融合蛋白，符合预期大小。成功构建 pCzn1-PLCζ原核表达载体，表达并纯化了其融合蛋白，Western blot 试验表明其蛋白分子的完整性良好，这将有利于对 PLCζ蛋白进行深入的研究。
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| 关 键 词： | 磷脂酶C zeta蛋白 原核表达 Western blot |
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