| 巨型艾美耳球虫IMP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备 |
| |
| 引用本文： | 林倩,黄驹辉,唐牧之,江和基,黄志坚,殷光文.巨型艾美耳球虫IMP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备[J].福建农林大学学报(自然科学版),2016(3):290-295. |
| |
| 作者姓名： | 林倩 黄驹辉 唐牧之 江和基 黄志坚 殷光文 |
| |
| 作者单位： | 福建农林大学动物科学学院/福建省动物药物工程实验室,福建 福州,350002 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金---青年基金项目(31502058)；福建省科技厅引导性项目(2015N0017)；大学生创新创业训练计划项目(201510389187) |
| |
| 摘 要： | 免疫映射蛋白1(IMP1)是一种从巨型艾美耳球虫中发现的蛋白,具有良好的免疫原性和免疫保护性.本试验通过Em IMP1基因的克隆、原核表达以及多克隆抗体的制备,为后续深入研究该蛋白的生物学及免疫学功能奠定基础.首先,从未孢子化的巨型艾美耳球虫新疆株卵囊中提取总RNA,反转录合成c DNA,PCR扩增Em IMP1基因片段.其次,将Em IMP1基因扩增片段连接到原核表达载体p ET-28a构建表达质粒p ET-28a-Em IMP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株并进行表达;将纯化后的蛋白与等量弗氏佐剂乳化后皮下注射至2只新西兰大白兔体内,每隔2周免疫一次,一共免疫4次后取得的兔血清即为多克隆抗体.最后,用所获得的多克隆抗体,对纯化后的Em IMP1进行免疫印迹试验鉴定,用酶联免疫吸附测定法检测多克隆抗体的效价.结果表明,克隆出的Em IMP1基因的全长为1 140 bp,诱导出的蛋白大小为70 ku,且该蛋白在上清液和包涵体中均有存在.免疫印迹试验检测结果显示,用上述方法制备的多克隆抗体具有良好的特异性,酶联免疫吸附测定法检测结果表明该多克隆抗体具有高效价.因此,可通过原核表达蛋白Em IMP1免疫兔子制备特异性好且效价高的多克隆抗体.
|
| 关 键 词： | 巨型艾美耳球虫 IMP1基因 原核表达 多克隆抗体 |
Prokaryotic expression and preparation of polyclonal antibody against IMP1 protein of Eimeria maxima |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Eimeria maxima IMP1 gene prokaryotic expression polyclonal antibody |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
