| 龙须菜卤代烷烃脱卤酶基因的转录及原核表达 |
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| 引用本文： | 孙鹏,杜宇,吕燕,孙雪,徐年军.龙须菜卤代烷烃脱卤酶基因的转录及原核表达[J].水产学报,2019,43(12):2468-2475. |
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| 作者姓名： | 孙鹏 杜宇 吕燕 孙雪 徐年军 |
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| 作者单位： | 宁波大学海洋学院, 浙江 宁波 315211,绍兴市环保科技服务中心, 浙江 绍兴 312000,宁波大学海洋学院, 浙江 宁波 315211,宁波大学海洋学院, 浙江 宁波 315211,宁波大学海洋学院, 浙江 宁波 315211 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31672674)；宁波市科技局国际合作项目(2017D10019) |
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| 摘 要： | 卤代烷烃脱卤酶(HLD)是一类能降解卤代脂肪化合物的酶,为今后将藻类HLD用于环境中卤素化合物的降解提供资料,本实验利用生物信息学、荧光定量PCR和pET28a表达系统对大型红藻龙须菜中HLD的酶学特性、转录表达和原核表达进行了研究。生物信息学分析结果显示,龙须菜中HLD基因(记为GlHLD)开放阅读框长969 bp,理论分子量约为36.33 ku,等电点约为5.53;该Gl HLD序列与绳状龙须菜的一条HLD序列(PXF45553.1)完全一致,与绳状龙须菜和皱波角叉菜等红藻优先聚类。荧光定量PCR结果表明,高温下底物1,2-二氯乙烷和植物激素水杨酸可促进GlHLD基因的表达,其表达量分别为常温组的3.64、2.64和2.43倍。GlHLD与pET28a质粒构建的重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出具有脱卤酶活性的蛋白;该蛋白的最佳诱导条件为16°C、0.1 mmol/L IPTG诱导12 h,最后用镍柱对GlHLD蛋白进行了初步纯化。本研究为进一步了解藻类HLD家族及获得高纯度HLD酶奠定了基础。
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| 关 键 词： | 龙须菜 卤代烷烃脱卤酶 转录 原核表达 |
| 收稿时间： | 2018/10/19 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2019/1/2 0:00:00 |
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