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伯氏疏螺旋体TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法的建立及对新疆地区蜱的检测
引用本文:王娅,叶锋,刘丽娅,谢彩云,谷文喜,钟旗,易新萍,古丽扎提?塔力甫汗,马晓菁.伯氏疏螺旋体TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法的建立及对新疆地区蜱的检测[J].中国动物检疫,2019,36(11):89-94.
作者姓名:王娅  叶锋  刘丽娅  谢彩云  谷文喜  钟旗  易新萍  古丽扎提?塔力甫汗  马晓菁
基金项目:国家重点研发计划项目(2017YFC1200500)
摘    要:为建立一种TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR方法,来快速、特异地检测伯氏疏螺旋体,根据GenBank发表的伯氏疏螺旋体16SrRNA序列,应用分子生物学软件进行比对,选取保守序列设计特异性引物及TaqMan-MGB探针,并优化荧光定量PCR反应体系及条件,分别对大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体进行扩增;构建伯氏疏螺旋体标准株16SrRNA基因片段阳性质粒,10倍系列稀释后进行real-time PCR扩增,测定该方法的敏感性。结果可见:仅伯氏疏螺旋体出现阳性扩增,而大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体扩增均为阴性;该方法对阳性质粒的检测限约为100 copies/μL。应用该方法对新疆地区的100份蜱DNA样本进行检测,发现7份为伯氏疏螺旋体阳性。结果表明,本研究建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法具有较高的特异性及良好的敏感性,为今后伯氏疏螺旋体的快速诊断及流行病学调查提供了技术支撑。

关 键 词:伯氏疏螺旋体  TaqMan-MGB探针  荧光定量PCR    检测  新疆

Establishment of a TaqMan-MGB Probe Real-time PCR Assay for Detection of Borrelia Burgdorferi in Ticks in Xinjiang
Wang Y,Ye Feng,Liu Liy,Xie Caiyun,Gu Wenxi,Zhong Qi,Yi Xinping,Gulizhati?TaliFuhan,Ma Xiaojing.Establishment of a TaqMan-MGB Probe Real-time PCR Assay for Detection of Borrelia Burgdorferi in Ticks in Xinjiang[J].China Journal Of Animal Quarantine,2019,36(11):89-94.
Authors:Wang Y  Ye Feng  Liu Liy  Xie Caiyun  Gu Wenxi  Zhong Qi  Yi Xinping  Gulizhati?TaliFuhan  Ma Xiaojing
Abstract:
Keywords:
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