| 草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 王晓丰,薛晖,丁正峰,唐建清,夏爱军,熊怀生.草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立[J].福建农业学报,2012,27(5):465-469. |
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| 作者姓名： | 王晓丰 薛晖 丁正峰 唐建清 夏爱军 熊怀生 |
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| 作者单位： | 1. 江苏省淡水水产研究所,江苏南京,210017
2. 江苏省淡水水产研究所,江苏南京210017;国家大宗淡水鱼类产业技术体系南京综合试验站, 江苏南京210017
3. 淮安市楚州区水产技术推广站,江苏淮安,223001 |
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| 基金项目： | 国家现代农业产业技术体系建设专项 |
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| 摘 要： | 为更加快速、灵敏地检测草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV),建立环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。根据GenBank中GCRV HZ08等毒株VP6蛋白基因序列设计引物,以GCRV弱毒疫苗株(GCHV-892)总RNA为模板建立RT-LAMP反应,对扩增产物用限制性内切酶PvuⅡ进行酶切鉴定,所得酶切产物大小符合预期值。随后对LAMP反应体系包括Mg2+、dNTPs、甜菜碱(betaine)和内外引物浓度比进行了优化,并以含VP6蛋白基因的重组质粒(pEASY-VP6)为模板考量了该方法的敏感性,结果显示最低检测限为10copies.μL-1,比RT-PCR检测方法敏感10倍。特异性试验表明与白斑综合征病毒(WSSV)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、病毒性神经坏死病毒(VNNV)无交叉反应。应用RT-LAMP方法检测16份疑似出血病草鱼,6份病料获得了阳性扩增,与RT-PCR检测结果一致。
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| 关 键 词： | 草鱼出血病 呼肠孤病毒 逆转录环介导等温扩增 检测方法 |
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