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大肠杆菌acrR插入序列对acrAB表达水平及多重耐药性的影响
引用本文:任艳娜,李健,甄盼盼,付小平,刘志杰,任金程,刘雅红,曾振灵,蒋红霞.大肠杆菌acrR插入序列对acrAB表达水平及多重耐药性的影响[J].中国预防兽医学报,2013(2):121-125.
作者姓名:任艳娜  李健  甄盼盼  付小平  刘志杰  任金程  刘雅红  曾振灵  蒋红霞
作者单位:华南农业大学兽医学院广东省兽药研制与安全评价重点实验室
基金项目:国家自然科学基金-广东省自然科学基金联合基金重点项目(U1031004、U0631006)
摘    要:为研究大肠杆菌(E.coli)分离株ED28的acrR基因中777bp插入片段对外排泵AcrAB表达水平及多重耐药性的影响,本研究将野生型acrR通过互补实验导入ED28中得到C-ED28。通过药物的最低抑菌浓度(MIC)测定、有机溶剂耐受性试验和实时定量PCR(qPCR)等方法检测菌株中AcrAB外排泵的活性。通过PCR方法检测ED28和C-ED28喹诺酮耐药决定区(QRDR)的氨基酸突变及携带的质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因。结果显示,临床分离菌株ED28对12种抗生素呈多重耐药表型,而互补菌株C-ED28恢复了对多种药物的敏感性。当能量抑制剂(CCCP)存在时,喹诺酮类和β-内酰胺类药物对ED28的MIC普遍降低,而对C-ED28的MIC保持不变。ED28对染料溴化乙锭(EB)的MIC为512μg/mL,对正己烷和环己烷耐受;而C-ED28对染料EB的敏感性增强,MIC为16μg/mL,对正己烷耐受,对环己烷不耐受。qPCR结果显示,基因acrA和acrB在C-ED28中的表达水平低于亲本菌株ED28,而基因marA在C-ED28中的表达水平高于ED28。靶位突变检测和耐药基因检测结果显示,ED28存在gyrA(Ser83Leu和Asp87Asn)和parC(Ser80Ile)双突变,携带aac(6’)-Ib-cr、blaCTX-M-27和blaTEM-13个质粒编码耐药基因;而C-ED28仅存在gyrA(Asp87Asn)一个突变位点,并丢失aac(6’)-Ib-cr、blaTEM-1两个基因。

关 键 词:AcrR  表达水平  耐药性  外排泵

Effect of insertion within acrR gene on acrAB expression and multiple resistance in an Escherichia coli isolate
REN Yan-na,LI Jian,ZHEN Pan-pan,FU Xiao-ping,LIU Zhi-jie,REN Jin-cheng, LIU Ya-hong,ZENG Zhen-ling,JIANG Hong-xia.Effect of insertion within acrR gene on acrAB expression and multiple resistance in an Escherichia coli isolate[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2013(2):121-125.
Authors:REN Yan-na  LI Jian  ZHEN Pan-pan  FU Xiao-ping  LIU Zhi-jie  REN Jin-cheng  LIU Ya-hong  ZENG Zhen-ling  JIANG Hong-xia
Institution:(Guangdong Provincial Key Laboratory of Veterinary Pharmaceutics Development and Safety Evaluation,College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China)
Abstract:
Keywords:
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