| 利用PCR介导的基因置换技术构建阿维链霉菌bkdF-突变株 |
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| 引用本文： | 熊伟,梁运祥,朱浩君,闵勇,吕和平,郑应华.利用PCR介导的基因置换技术构建阿维链霉菌bkdF-突变株[J].农业生物技术学报,2005,13(5):672-678. |
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| 作者姓名： | 熊伟 梁运祥 朱浩君 闵勇 吕和平 郑应华 |
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| 作者单位： | 1. 华中农业大学农业微生物国家重点实验室,武汉,430070
2. 北京生物医药研究所,北京,100091 |
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| 摘 要： | PCR介导的基因置换技术是一种利用λ噬菌体Red重组系统在微生物中进行基因中断的新方法。实验利用该方法快速构建基因中断载体，并成功地置换了阿维链霉菌（Streptomyces avermitilis）bkdF基因。先合成1对长度分别为58和59nt的引物，其5’端的39nt序列分别与bkdF基因两侧同源，3’端则分别与安普霉素抗性标记盒（aac（3）Ⅳ＋onT）两侧序列一致。以该引物扩增的PCR产物电转化能表达λRed重组酶且含有目标质粒的大肠杆菌（Eschcrichia．coli）菌株BW25113／pU790／pXW1224，获得了阳性重组质粒pXW1230。将该质粒中的大小为4．0kbBglⅡ目的片段插入基因置换载体pHZl35l，再接合转移至阿维链霉菌BJBM9903，筛选得到表型为Apma^RThio^S的接合子。PCR验证并对发酵产物进行HPLC和MS分析，证实该接合子为敞dkdF^-突变株。
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| 关 键 词： | PCR介导的基因置换 Red重组 阿维链霉菌 支链α酮酸脱氢酶基因（bkdF） 基因中断 |
| 收稿时间： | 2004-12-16 |
| 修稿时间： | 2005-03-16 |
Construction of Streptomyces avermitilis bkdF- Mutants Using PCR-mediated Gene Replacement Method |
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| XIONG Wei,LIANG Yun-Xiang,ZHU Hao-Jun,MIN Yong,Lü He-Ping,ZHENG Ying-Hua.Construction of Streptomyces avermitilis bkdF- Mutants Using PCR-mediated Gene Replacement Method[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2005,13(5):672-678. |
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| Authors: | XIONG Wei LIANG Yun-Xiang ZHU Hao-Jun MIN Yong Lü He-Ping ZHENG Ying-Hua |
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| Institution: | 1. National Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China; 2. Beijing Institute of Biomedicine, Beijing, 100091, China |
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