| 猪IFN-γ mRNA竞争性RT-PCR定量检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 谢印乾,高云英,沈志强,朱和鸣,管宇,王茹,张锋钢.猪IFN-γ mRNA竞争性RT-PCR定量检测方法的建立[J].中国兽医科技,2006,36(12):1000-1004. |
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| 作者姓名： | 谢印乾 高云英 沈志强 朱和鸣 管宇 王茹 张锋钢 |
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| 作者单位： | [1]西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100 [2]山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256618 [3]福建农林大学,福建福州350002 |
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| 基金项目： | 致谢：王金良、肖跃强老师在本研究中给予了指导,焦明硕士给予了帮助,在此一并深表感谢. |
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| 摘 要： | 无菌分离的猪外周血单个核细胞（PBMC）,经ConA体外刺激培养15 h后提取细胞总RNA.以此总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增到了435 bp的IFN-γ基因.把扩增到的IFN-γ基因与pMD18-T载体连接,构建了pMD-IFN435重组质粒.用另一对引物对重组质粒pMD-IFN435内部进行PCR扩增,得到了257 bp（含PstⅠ酶切位点）的基因片段,将此基因片段连接到pMD18-T载体上构建了pMD-IFN257重组质粒.将pMD-IFN257双酶切（PstⅠ＋SalⅠ）后回收的目的片段与pMD-IFN435双酶切（PstⅠ＋SalⅠ）后回收的目的片段连接,得到了含有367bp目的片段的重组质粒pMD-IFN367,即内标准DNA模板.以定量后的pMD-IFN367与2倍梯度稀释的pMD-IFN435进行竞争PCR扩增,建立了能够准确、方便定量检测猪IFN-γmRNA的标准竞争曲线的线性回归方程（y=0.414x-1.864）.
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| 关 键 词： | 猪 IFN-γ基因 定量检测 RT-PCR |
| 文章编号： | 1673-4696（2006）12-1000-05 |
| 收稿时间： | 2006-07-07 |
| 修稿时间： | 2006-08-28 |
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